nyt 563-2002 禽霍乱（禽巴氏杆菌病）诊断技术

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1、11.220IBCs41中华人民共和国农业行业标准NY/T563-2002禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术Diagnostictechniquesforfowlcholera(avianpasteurellosis)2002一08一27发布2002一12一01实施中华人民共和国农业部发布5osNY/'r563-2002前言禽崔乱(fowlcholera)又名禽巴氏杆菌病(avianpasteureltosis).是由多杀性巴氏杆菌引起的家畜和野禽的接触传染性疫病本病呈现急性败血症变化，其发病率和死亡率很高.对养禽业危害严市被lit界动物以'l组织仁WorldOrgan

2、izationforAnimalHealth(英),OfficeInt。了:ionaldesEpizootic(法)，OIE〕定为”类动物疫病，我国列为几类动物疫病。术标准在主要诊断技术方面与OIE《诊断试验和疫苗手册))(2000年版)第2.-1.I1条的规定是一致的。但也有以卜左异:OII;((手册)Z.7.11条对具体操作程序未作详细描述，本标准则根据实践经验规定了具体操作程序;本标准末完全采用其他推荐性技术本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准山农业部畜牧兽医局提出。本标准由个Iij动物检疫标准化委员会归口。本标准起i;Y:单位:中国农业科学院哈尔滨兽医

3、研究所本标准主要起草人:曲连东、吴东来。Nv/T563一2002禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术范围本标准规定J禽霍乱的诊断技术要求本标准适用于鸡、鸭、鹅等禽霖乱的诊断和检疫2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引片1而成为本标准的条款凡是注{}期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而鼓励根据卞标准达成协议的各方研究是否可使川这此文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本适川十本标准GR4789.28-1994食品卫生微生物学检验染色法、培养鹅和试刹3初步诊断根据典JU症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极

4、染色的杆菌.of初步诊断本病〔但确诊应依靠病原分离鉴定。3.1症状3.1.1急性型症状最初出现禽群「}，些禽只突然死亡随后即出现另外禽只发热、{火食、抑郁、流诞、腹泻、羽毛粗乱、呼吸困难，临死前出现发组3.1.2慢性症状急性型耐过的或由弱毒菌株感染的禽只可呈慢性I病程.it特拟为局部感染，在关竹、趾垫、腿鞘、胸什粘液囊、眼结膜、肉垂、喉肺、气囊、中耳、骨髓、脑膜等部位呈现纤维素性化脓性渗出、坏死或不同程度的纤维化3.2病理变化急性IM的病变主要是被动性充血、出血，肝、脾肿大和局灶性坏死，肺炎、腹腔和心包液增多。慢性刑t:要是局灶部纤维素化脓性渗出、坏死和纤维化3.3

5、病料涂片检菌3.3门抹片的制备1月镊f夹待病变组织肝或脾.然后以灭菌剪刀剪取小块，夹出后将其新鲜切面在载玻片卜压印或涂抹成薄层;若取血液，用灭菌剪)I剪开心脏进行蘸取或剪取凝血块、用新鲜切面在载玻片上压印或涂抹成薄层3.3.2千燥自然卜燥3.3.3固定将于燥好的抹片，涂抹而向上，以其背面在酒精火焰上来回通过数次略作加热进行固定13.4革兰氏染色法固定好的抹片}飞滴加草酸铰结晶紫色液，染色2min~水洗、加苹’介氏碘溶液于抹片卜媒染2min，水洗卜加95g洒精于抹片卜脱色1min-，水洗，加稀释碳酸复红复染”、，水洗，吸f，镜检。本NY/'e563-2002病原体为革

6、兰氏阴性球杆菌或短杆菌，菌体大小为。.2pm-0.4ptmX0.6j-一}'.5hm，单个或成对存在，常有英膜3.3.5其他染色法甲醇固定.按GB4789.28--1994中2.6或2.1规定进行，瑞特氏或美蓝染色呈两极浓染的菌体4病原分离和鉴定4.，病原分离4.1.1病料的采集4.1.11最急性和急性病例可采集死亡禽只的肝、脾、心血;慢性病例一般采集局部病灶组织;对不新鲜或已被污染的样品，可自骨髓中采取病料。采病料时用烧红的刀片烧烙组织，而后用灭菌棉拭子或接种环通过烧烙表面插人组织或心血内取样4门.1.2如果为活禽，可通过鼻孔挤出粘液.或将棉拭子插人鼻裂中取样4.

7、1.2培养基制备5写鸡血清葡萄糖淀粉琼脂、鲜血琼脂培养基.配制方法见附录A,4.1.3动物接种如果病料污染严重，则可将。.Zml碾碎的病料，经皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡，接种动物在24h--48h内死亡可以从肝脏、心血中分离到多杀性巴氏杆菌4.了.4培养将病料接种十5%鸡血清的葡萄糖淀粉琼脂(见第A.1章)、鲜血琼脂培养基(见第A.2章)在35〔一37C下培养，经18h-24h培养后菌落直径为1m。一3mm菌落呈散在、圆形，表面凸起呈奶滴状〔〕4.2病原鉴定4.2.1培养特性为兼性厌气菌，’仁长最适温度为35C-37(经18h-24h培养后，菌落白_径为