nyt555-2002 《动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》

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1、ICS11.220s41中华人民共和国农业行业标准NY/T555-2002动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法Detectionmethodsforcoliformgroup,faecalcoliformgroup，coliformbacteriainanimalproducts2002一08一27发布2002门2一01实施中华人民共和国农业部发布431NY/T555-2002前言大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌是食品卫生的三项重要的卫生指标。当前国际上采用的方法有美国公职分析化学家协会(AOAC)方法及日本人介绍的煌绿乳

2、糖胆盐肉汤(BGLB)和EC试管发酵法。为满足要求，依照日本采用的BGLB和EC试管发酵法并进行适当改进，建立了本检测方法。本方法用BGLB发酵管检测大肠菌群并计算最大可能数(MPN)值，用EC肉汤发醉管检测粪大肠菌群并计算MPN值，在检测粪大肠菌群的基础上通过生化鉴定检测大肠杆菌并计算MPN值，鉴定中省去了革兰氏染色。这些重要改进缩短了检验时间，简化了操作程序，而且经对比试验证明结果可靠，适合于动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测。本标准的附录A是规范性附录，附录B是资料性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动

3、物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位:天津动植物检疫局。本标准主要起草人:秦贞奎、张碧波、侯艳梅、杨金良、薛振源。NY/T555-2002动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法1范围本标准规定了动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法。本标准适用于动物产品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准2.1大肠菌群coliforms;coliformgronp一群能分解乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆茵。2.2粪大肠菌群faecalcoliforms;faec

4、alcoliformsgronp44.5C发酵乳糖产气的一群细菌，是用来表示来源于粪便的大肠菌群。2.3大肠杆菌escherichiacoli;coliformbacteria符合大肠菌群和粪大肠菌群定义，用IMVic(靛基质、甲基红、维培和西蒙氏柠檬酸盐)生化试验进一步鉴定，四种生化反应结果依次为++一一和一+一一的细菌。2.4最大可能数mostprobablenumber,MPN采用多次稀释方法所求得的最近似数，是通过概率计算出来的。2.5IMViC靛基质试验、甲基红试验、维培(VP)试验和构椽酸盐利用试验的缩写。3检测方法3.飞

5、材料准备3.1.1仪器吸管，恒温水浴箱，培养箱，匀浆器，100m1.,200mL和500mL三角瓶及广口瓶，直径5mm的玻璃珠。3.1.2培养基及试剂配制方法见附录A(规范性附录)。31.2.1煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB),配制方法见第A.1章。3.1.2.2EC肉汤，配制方法见第A.2章。3门.2.3伊红美蓝琼脂(EMB)，配制方法见第A.3章。3.1.2.4甲基红一维培(MR-VP)培养基，配制方法见第A.4章。3.1.2.5西蒙氏柠檬酸盐培养基，配制方法见第A.5章。NY/'r555-20023.1.2.6靛基质(“引噪)试验培

6、养基，配制方法见第A.6章。3.1.2.7科瓦克(Kovacs)氏靛基质试剂，配制方法见第A.7章3门.2.8甲基红指示剂，配制方法见第A.8章。3.1.29维培(VP)试剂，配制方法见第A.9章。3.2检测程序本标准的检测程序见图1.，图1检测程序流程图3.3样品制备3.3.1无菌操作从动物产品中采取有代裹性的样品如有包装则用75%乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检测，应将冷冻样品置于一15℃冰箱保存。非冷冻而易腐的样品，应置于4℃冰箱保存。检测前冷冻样品可于2℃一一5℃下在18h内，或于45℃下在15min内解冻。13.2不同样

7、品匀浆液的制备3.3.2.1液体样品:以无菌吸管取样25mL加人到装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)内，制成1:10的样品匀浆。3.3-2.2固体和半固体样品:以无菌操作取样25'g，加人到装有225mL灭菌生理盐水的灭菌匀浆器内，于8000r/min均浆2min，制成1:10样品匀浆(也可用灭菌乳钵研磨的方式代替)。NY/T555-20023.3.2.3样品稀释液的制备:根据样品污染情况，用灭菌生理盐水将样品匀浆制成一系列十倍递增的样品稀释液(通常采用10-',10-1和10-’稀释)。从制备样品匀浆

8、至稀释完毕，全过程不得超过15mine3.4大肠菌群的测定3.4.1大肠菌群MPN值的测定3.4.1.1每个样品通常选用10-1,10-2和10-3三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管BGLB(见第A.1章)，