细胞工程复习资料

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1、细胞工程复习提纲绪论名词：细胞工程：细胞工程是按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。第1章细胞培养的设施与基本条件1.细胞工程实验室的要求和基本设置（无菌，6方面工作）要求保持严格无菌环境，避免微生物及其他有害因素的影响。六方面的工作：无菌操作、培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。2.动植物细胞工程实验室的设置1.动物细胞工程实验室的设置(1)无菌操作室无菌操作室是相对密封、防尘、防菌的工作空间。理想的无菌操作室应划分为更衣间、缓冲间及操作间三部分。(2)培养与观察室(3)制备室

2、：在该区主要进行培养液及有关培养用液体等的制备。(4)储藏室(5)清洗和灭菌室2.植物细胞工程实验室的设置(1)无菌操作室(2)培养室(3)鉴定室(4)清洗室(5)灭菌室(6)制备室(7)驯化移植室3.常用设备1.动物与植物细胞工程实验室通用的仪器设备(1)超净工作台(2)倒置显微镜(3)电热干燥箱(4)水纯化装置(5)冰箱(6)压力蒸汽消毒器(7)细胞计数板和电子细胞计数仪(8)过滤除菌装置(9)离心机(10)移液管和吸管(11)离心管(12)移液器(13)天平2.动物细胞工程实验室的常用仪器设备(1)培养箱(2)显微操作仪(3)细胞融合仪(4)细胞冷冻储存器(5)培养用器皿

3、(6)手术器械3.植物细胞工程实验室的常用仪器设备(1)光照培养箱(2)人工气候室(3)摇床(4)培养瓶第2章清洗与消毒1.玻璃器皿清洗步骤及要求一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。清洗后的玻璃器皿要求干净、透明、无油迹，且无任何残留物质。2.常用的物理灭菌(1)紫外线消毒紫外线消毒用于空气、操作台表面和不能使用其他方法进行消毒的器皿。紫外线的直接作用机制是通过破坏微生物的核酸和蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。紫外线可产生臭氧，污染空气，对试剂和培养液都有不良影响，对人皮肤、眼睛都有伤害。因此，不能开着紫外灯进行实验操作。(2

4、)电离辐射消毒主要指使用放射性核素产生的X射线和加速器等发出的辐射进行灭菌消毒，适用于消毒量大和不适于做高压或过滤等培养用品。电离辐射灭菌时物品不会升温，可直接对密封包装的物品进行灭菌。但由于电离辐射的诱变作用很强，不适合消毒活的生物材料。(3)湿热消毒消毒物品不能装得过满，应保证其内气体的流通，以防止消毒器内气体阻塞而发生危险。在加热升压之前，先要打开排气阀排放内部的冷空气，然后关闭排气阀，同时检验安全阀是否活动自如。继后开始升压，当达到所需压力时开始计算消毒时间。消毒过程中，操作者不能离开工作岗位，要定时检查压力及安全阀，防止发生意外。(4)干热消毒法干热消毒法是用电热烤箱

5、将物品加热到160℃以上，并保持90-120min，以杀死细菌和芽孢。该法主要用于消毒玻璃器皿。消毒完毕后不可马上将烤箱门打开，以免温度骤降而使玻璃器皿破裂。干热消毒的优点是消毒后的器皿干燥、易于储存，缺点是热传导慢。灼烧也是干热消毒灭菌的方法之一。(5)过滤除菌过滤除菌是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌目的。此方法大多用于遇热易发生变性而失效的试剂或培养液。目前，大多数实验室采用微孔滤膜器除菌，使用这种滤器的关键步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。根据实验室条件和过滤体的要求，可选用加压过滤除菌方法和负压过滤除菌方法。3.常用的化学消毒剂消

6、毒剂主要是75%酒精、甲醛、环氧乙烷、氯已定、戊二醛、碘伏和磺酊、过氧乙酸、乳酸、2%煤酚皂溶液(来苏儿)、1‰新洁尔灭等。第3章细胞培养的基本方法1.名词：细胞生长曲线：细胞生长曲线是观察细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标，以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标作坐标图。细胞分裂指数：细胞分裂指数是指分裂期细胞在全部细胞中所占的百分率，用以表示细胞的增殖旺盛程度。细胞贴壁率：细胞贴壁率又称接种存活率，用于观察贴壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存能力和部分底物材料的生物相容性。活体染色：体外活体染色就是在体外条件下用某种染色剂(即活体染料)对活的组织或细胞进行染色，而不影响活

7、细胞的生命活动的一种方法。2.无菌操作技术（基本操作、注意事项）在超净工作台上进行无菌操作。实验前点燃酒精灯，所有操作均应在火焰近处并经过烧灼进行。金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火。烧过的器械要冷却后才能使用，否则易使组织和细胞受损。已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管内的培养液烧焦后会产生有害物质，再用时会将其带到培养基中。开启、关闭长有细胞的培养瓶时，火焰灭菌时间要短，防止因温度过高烧死细胞。胶塞、橡皮乳头过火焰时也不能时间过长，以免烧焦产生有毒气体，危害细胞。进行培