植物细胞工程复习资料

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1、植物细胞工程复习资料第一章植物细胞工程的概念和发展过程概念：植物细胞工程(plantcellengineering)：是在离体培养条件下，在细胞水平上对植物材料进行遗传操作的技术，即对植物体的任何一个部分（器官、组织、细胞、原生质体等）进行离体诱导使其成为完整植株的技术。植物生物技术（Biotechnology）：是现代遗传学、细胞生物学和分子生物学的一个复杂集合体，以生命科学为基础，利用生物体系和工程原理生产生物制品和创造新物种的综合科学技术。范畴：同生物技术。胚状体（somaticembryos）：在离体培养过程中由外植体或愈伤组织产生与受精卵发育方式类似的胚胎结构现象植

2、物细胞工程研究的内容与任务：研究内容：研究植物器官、组织、细胞等在离体培养时需要的有机营养、无机营养、植物激素、温度、湿度、光照、等条件以及发育阶段和基因等遗传操作。研究任务：通过植物细胞工程这一技术手段，在离体培养条件下研究植物组织、器官、细胞、原生质体经离体诱导形成的愈伤组织形态发生规律、外界环境条件和培养基对它的作用以及由其诱导而形成的再生植株群体的遗传稳定性和变异性。细胞是构成植物有机体的结构和生命活动的基本结构单位；植物细胞的全能性，即植物细胞是在生理上和发育上具有潜在全能（totipotent）的功能单位。简述细胞工程技术的发展阶段及性标志性成就？第二章实验室的建

3、立与消毒灭菌技术概念灭菌：是用物理或化学方法完全去除或杀死器物表面或内部微生物的过程。离体培养过程中的污染来源：A容器；B培养基；C外植体s;D环境；E工具；F操作过程G操作者本身；H超净台简述主要消毒灭菌技术有哪些？物理方法：热力、辐射、过滤化学方法：醇类、酚类、醛类、过氧化物等物理方法A热力灭菌：高温灭菌是最常用的方法。包括干热和湿热灭菌法。*干热灭菌：对象（不含水、耐高温的物品）类型：A干热空气灭菌(160－180℃)热穿透力差，受热温度不均匀。时间长，温度高B火焰灼烧湿热灭菌：对象（耐高温、不忌水的物品。）湿热蒸汽，穿透力强，灭菌时间短，也是最常用的一种方法。常采用常

4、压热灭菌和加压灭菌法。a煮沸或流通蒸汽灭菌对象：不能高压蒸汽灭菌的物品（常压下沸水和蒸汽的温度是100℃，一般处理30~60min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。）b蒸汽间歇灭菌对象：有机溶剂或含糖的培养基。（在常压流动蒸汽中，分三次在连续三天内进行，每次加热至100℃持续30min后，取出置30℃中培养24h，使未被杀死的芽孢和其它休眠体等萌发，在下一次加热时致死。）c高压蒸汽灭菌是组织培养中最常用和不可缺少的灭菌方法。在密闭耐压的灭菌锅中，增加蒸气压，提高蒸气温度，加强热穿透力，缩短灭菌时间，以迅速彻底灭菌。培养基和用具等都用这种方法灭菌。B辐射灭菌：非电离辐射（红

5、外线、紫外线、微波）、紫外灯（注:避免直接在紫外线下操作）、电离辐射（射线）：（穿透力强、适合不耐热物品、价格便宜）C过滤灭菌：孔径0.45或0.22微米（0.22微米滤膜除去病毒以外的所有微生物；0.45微米滤膜可过虑酶系或小量液体培养基）化学方法1、含氯化合物漂白粉：低毒有效。饱和液。不稳定，随配随用。酸性环境杀菌力强。可用于物体、外植体表面、管道、水池等。次氯酸钠：2-20%。杀菌力强。适用范围同上。第10页共10页植物细胞工程复习资料升汞：0.1-0.2%。重金属盐杀毒剂。用于外植体。2、过氧化物：双氧水：10-12%。强氧化性，用于外植体、不耐热的物品、环境等。过氧

6、乙酸：0.2-0.5%。高效速效消毒剂。强氧化性，杀菌力比双氧水强。同上。3醇类乙醇：70-75%。穿透力强，杀菌快，对病毒作用慢，对孢子有一定作用，对芽孢无作用。用作外植体灭菌第一步，也可用于皮肤台面和器具。4季铵盐类阳离子表面活性剂。高浓度凝固蛋白，低浓度抑制细菌代谢。对芽孢效果不佳。用于皮肤、金属器械等。简述具体消毒操作过程？1操作室和培养室：保持清洁，定期熏蒸消毒，常用苯酚（3～5％）、甲醛高锰酸钾（2：1/立方）。操前先打开紫外灯照射对室内消毒。喷洒酒精、过氧乙酸等。3-5%来苏尔（煤酚皂）擦洗培养架和地面。2超净工作台：净化台表面用70－75%乙醇擦净，气流吹10

7、－15min后才能开始工作。3操作工具：干热灭菌、灼烧、酒精浸泡4器皿类：热力灭菌5操作者：洗手，再用70%乙醇擦净并穿上工作服，工作前可开紫外灯照射30min，工作时必须关上，以防止紫外线对人的伤害，切不可开着紫外灯作业。6培养基：高压灭菌和过滤灭菌（从达到要求的温度算起。灭菌取决于温度，不直接取决于压力。灭菌的时间随灭菌液体的容积而不同。）7培养材料：茎尖、茎段、叶片（冲洗1-2h→洗衣粉（毛刷）→滤纸吸干→75%酒精→无菌水→2-10%次氯酸钠（0.1-0.2%升汞）→无菌水）；果实、种子（冲洗→