大鼠孕酮(prog) elisa kit

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1、大鼠孕酮酶联免疫分析（progestogen）ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0459r预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、或其它相关液体中孕酮含量。实验原理孕酮主要由黄体产生，故又叫黄体酮。孕酮通常要在孕酮作用的基础上才能发挥其作用。孕酮的主要作用，是促进子宫内膜特别是腺体的增长，为接纳受精卵做好准备，如受精卵着床后，使胚胎继续发育。对子宫内膜癌及增生过度的内膜腺体，孕酮则能使之萎缩退化。此外还能抑制子宫收缩，并减弱子宫对催产素的敏感性，使子宫活动减少，而起保胎作用。同时还与孕酮一起使乳腺发育，为产乳作好准备。

2、本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中孕酮水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入孕酮抗原、生物素化的抗大鼠孕酮抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的孕酮呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10mg/L，做系

3、列倍比稀释后，分别稀释成10mg/L，5mg/L，2.5mg/L，1.25mg/L，0.62mg/L，0.31mg/L，0.15mg/L，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0mg/L，临用前15分钟内配制。3.样品稀释液：1×20ml/瓶。4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释。稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀

4、释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。稀释方法同检测溶液A。8.底物溶液：1×10ml/瓶。9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10.终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。标本的采集及保存1．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。2．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标

5、本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤各试剂在使用前平衡至室温。1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品100ul，轻轻混匀，37℃，120分钟。2.弃去液体，甩干，不用洗涤。3.每孔加检测溶液A工作液100ul，37℃,60分钟。洗板3次，350ul/每孔，甩干。4.每孔加检测溶液B工作液100ul，37℃，60分钟，洗板5次，甩干。5.依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色30分钟。6.依序每孔加终止溶液50ul，终止反应。用

6、酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。注：1．每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。特异性本试剂盒可同时检测重组或天然的大鼠孕酮，且与其它相关蛋

7、白无交叉反应。计算以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。2．一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。3．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。4．如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。5．在

8、配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。6．底物请避光保存。检测范围：0.15mg/L-10mg/L说明1．试剂盒