hgt 3617-1999 苏云金杆菌可湿性粉剂

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1、HG3617-1999前言本标准是根据我国以往制定的苏云金杆菌企业标准等有关材料，结合我国实际情况而制定的。本标准对苏云金杆菌可湿性粉剂的要求、试验方法、抽样以及包装、运输等作了具体要求和规定，从而为苏云金杆菌的生产提供了统一的技术依据。本标准由中华人民共和国原化学工业部技术监督司提出。本标准由化学工业部沈阳化工研究院归口。本标准主要起草单位:中国农业大学应用化学系。本标准参加起草单位:湖北省生物农药工程研究开发中心、济南科贝尔生物工程有限公司。本标准主要起草人:刘丰茂、王开梅、钱传范、钟连胜、赵欣听、王绮文。1166中华人民共和国化工行业标准FIG3617-19

2、99苏云金杆菌可湿性粉剂Bacillusthuringiensiswettablepowder苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,B.t.)是目前应用最广泛的一种微生物杀虫剂，它的主要杀虫成分是伴抱晶体中的毒素蛋白，其中，对鳞翅目有毒力的蛋白相对分子质量为130000范围本标准规定了苏云金杆菌可湿性粉剂的要求、试验方法以及标志、标签、包装、贮运。本标准适用于由苏云金杆菌原药和助剂等制成的苏云金杆菌可湿性粉剂，主要用于防治鳞翅目害虫。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所有版本均为有效。所有标准都

3、会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T1250-1989极限数值的表示方法和判定方法GB/T1600-1979(1989)农药水分侧定方法GB/T1601-1993农药pH值的测定方法GB/T1604一工995商品农药验收规则GB/T1605-19790989)商品农药采样方法GB3796-1983农药包装通则GB/T5451-1984农药可湿性粉剂湿润性测定方法GB/T14825-1993农药可湿性粉剂悬浮率测定方法GB/T16150-1995农药粉剂、可湿性粉荆细度测定方法HG3616-1999苏云金杆菌原粉3要求外观:灰白色至

4、棕揭色疏松粉末，不应有团块。;一;苏云金杆菌可湿性粉剂应符合表1要求。表1苏云金杆菌可湿性粉剂控制项目指标指标项目32000IU/mg16000IU/mg8000IU/mg毒素蛋白，%)4.02.01.0毒力效价([PxIU/mg][HaIU/mg]))32000160008000.pH值6.0-7.5细度(75pm),%)981167HG3617一1999表1(完)指标项目32000IU/mg16000IU八ng8000IU/mg悬浮率(有效成分)，%)70湿润时间，min毛3水分%镇4.0注Px和H。分别为小菜蛾(Plutellaxylostella)和棉铃虫

5、(Heliothisarmigera)的缩写4试验方法除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水溶液。4.1抽样按照GB/T1605-19790989)中第五章“粉剂和可湿性粉剂的采样”进行，用随机数表法确定抽样的包装件。最终抽样量应不少于1009.4.2鉴别试验当用生物测定法检测产品质量产生疑问时，可用以下方法进行鉴定。用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法测定有效毒素蛋白的相对分子质量是否为130000，并同时测定毒素蛋白含最是否符合3.2指标的规定。4.3毒素蛋白含量的测定毒素蛋白含量可以用SDS-PAGE一扫描法和SDS-P

6、AGE一洗脱比色法两种方法进行测定，二者精密度、准确度接近，前者由于自动化程度更高，而定为仲裁法。4.3.1SDS-PAGE一扫描法(仲裁法)4.3.1.1方法提要用碱性溶液处理苏云金杆菌可湿性粉剂伴抱晶体，使其降解为毒素蛋白，然后通过SDS-PAGE，依蛋白质相对分子质量的差异，使毒素蛋白与其他杂蛋白分离，之后用薄层扫描仪或电泳图像扫描仪扫描蛋白区带面积，进行定量。4.3.1.2仪器、设备电泳仪。夹芯式垂直电泳槽(1.5mm凹形带槽橡胶模框)、凝胶板面积145mmX100mm(1.5mm,12孔样品槽模具)。高速薄层层析扫描仪或电泳图像扫描仪。离心机:10000

7、r/min,分析天平:精确至0.0001g,4.3-1.3试剂和溶液过硫酸按(AP),十二烷基硫酸钠(SDS),四甲基乙二胺(TEMED),氢氧化钠。30%丙烯酞胺:称取丙烯酞胺30g，亚甲基双丙烯酸胺(原称:甲叉双丙烯酸胺)0.8g,溶于100mL蒸馏水中，过滤，于4℃暗处贮存备用。1mot/L,PH8.8三经基甲基氨基甲烷-HCI缓冲液:称取三经基氨基甲烷30.25g溶于蒸馏水中，用浓盐酸调至pH8.8，用蒸馏水定容至250m工。1mot/L,pH6.8三Iq基氨基甲烷-HCI缓冲液:称取三9基氨基甲烷12.10g溶于蒸馏水中，用浓1168HG3617一199

8、9盐酸调至