hgt 3616-1999 苏云金杆菌原粉

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1、He3616-1999前言本标准是根据我国以往制定的苏云金杆菌企业标准等有关材料，结合我国实际情况而制定的。本标准对苏云金杆菌原粉的要求、试验方法、抽样以及包装、运输等作了具体要求和规定，从而为苏云金杆菌生产提供了统一的技术依据。本标准的附录A是提示的附录，附录B是标准的附录。本标准由中华人民共和国原化学工业部技术监督司提出。本标准由化学工业部沈阳化工研究院归口。本标准主要起草单位:中国农业大学应用化学系。本标准参加起草单位:湖北省生物农药工程研究开发中心、济南科贝尔生物工程有限公司。本标准主要起草人:刘丰茂、王开梅、钱传范、钟连胜、赵欣听、王绮文。1156中华

2、人民共和国化工行业标准HG3616-1999苏云金杆菌原粉Bacillusthuringiensistechnical苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,B.t)是目前应用最广泛的一种微生物杀虫剂，它的主要杀虫成分是伴抱晶体中的毒素蛋白，其中，对鳞翅目有毒力的蛋白相对分子质量为130000范围本标准规定了苏云金杆菌原粉的要求、试验方法以及标志、标签、包装、贮运本标准适用于防治鳞翅目害虫的苏云金杆菌原粉。2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应

3、探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T1250-1989极限数值的表示方法和判定方法GB/T1600-19790989)农药水分测定方法GB/T1601-1993农药pH值的测定方法GB/T1604-1995商品农药验收规则GB/T1605-19790989)商品农药采样方法GB3796-1983农药包装通则GB/T16150-1995农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法3要求3.1外观:灰白色至棕褐色粉末。3.2苏云金杆茵原粉应符合表1要求。表1苏云金杆菌原粉控制项目指标指标项目一等品合格品毒素蛋白，%)7.06.0毒力效价([PxIU/mg口[HaIU/mg

4、]))5000040000pH值5.5^7.0水分，/0a《6.0细度，45jam,0,)98注:Px和Ha分别为小菜蛾(Plutellaxylostella)和棉铃虫(Heliothisarmigera)缩写.国家石油和化学工业局1999-06-16批准2000一06一01实施157HG3616一19994试验方法除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，所述溶液均为水溶液。4.1抽样按照Gs/T1605-19790989)中“原粉采样”进行，用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量应不少于100go4.2鉴别试验当用生物测定法评价产品质量产生疑问时，可用以下方法

5、进行鉴定。用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法测定有效毒素蛋白的相对分子质量是否为130000，同时测定其含量是否符合3.2指标的规定。4.3毒素蛋白含量测定方法毒素蛋白含量可以用SDS-PAGE一扫描法和SDS-PAGE一洗脱比色法两种方法进行测定，二者精密度、准确度接近，前者由于自动化程度更高，而定为仲裁法。4.3门SDS-PAGE一扫描法(仲裁法)4.3.1门方法提要用碱性溶液处理苏云金杆菌原粉伴抱晶体，使其降解为毒素蛋白，然后通过SDS-PAGE，依蛋白质相对分子质量的差异，使毒素蛋白与其他杂蛋白分离，之后用薄层扫描仪或电泳图像扫

6、描仪扫描蛋白区带面积，进行定量。4.3.1.2仪器、设备电泳仪。夹芯式垂直电泳槽(1.5mm凹形带槽橡胶模框)、凝胶板面积145mmX100mm(1.5mm,12孔样品槽模具)。高速薄层层析扫描仪或电泳图像扫描仪。离心机:10000r/min,分析天平:精确至0.0001g,4.3.1.3试剂和溶液过硫酸按(AP),十二烷基硫酸钠(SDS),四甲基乙二胺(TEMED),氢氧化钠。30%丙烯酸胺:称取丙烯酸胺30g，亚甲基双丙烯酞胺(原称:甲叉双丙烯酞胺)0.8g，溶于100mL蒸馏水中，过滤，于4'C暗处贮存备用。1mol/L,pH8.8三9基甲基氨基甲烷-HC

7、I缓冲液:称取三9基甲基氨基甲烷30.25g溶于蒸馏水中，用浓盐酸调至pH8.8，用蒸馏水定容至250mL.1mol/L,pH6.8三经基甲基氨基甲烷-HCI缓冲液:称取三经基甲基氨基甲烷12.10g溶于蒸馏水中，用浓盐酸调至pH6.8，用蒸馏水定容至100mL,电极缓冲液:称取三经基甲基氨基甲烷3.03g，甘氨酸14.42g，十二烷基硫酸钠1g，用水溶解并定容至1000ML,3X样品稀释液:1mol/L,PH6.8=g基甲基氨基甲烷-HCI18.75mL，十二烷基硫酸钠6g，甘油30mL,琉基乙醇15mL，少许澳酚蓝，用燕馏水定容至100mL,染色液称取考马斯

8、亮蓝(CBB)R-250