黄芩苷对人外周血t细胞tcr vβ mrna表达的影响的论文

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1、黄芩苷对人外周血T细胞TCRVβmRNA表达的影响的论文作者：龚淑琪，傅颖媛，孙午，姜青龙，舒奇【摘要】目的研究黄芩苷对人外周血t细胞表面tcrvβmrna表达的影响及其可能受体。方法采用尼龙毛柱法分离t淋巴细胞，将其分为空白对照组（t1）、黄芩苷组（t2）、抗体封闭用药组（t3）、抗体封闭对照组（t4），37℃培养48h，trizol法提取总rna，实时荧光rt-pcr法检测各组tcrvβmrna表达。结果t2组较t1组tcrvβmrna的表达明显增强（p﹤0.01）；t3组较t2组tcrvβmrna的表达明显减低（p

2、﹤0.01）；t3组较t4组tcrvβmrna的表达增高（p>0.05）。结论黄芩苷能显著增加t细胞表面tcrvβmrna的表达；t细胞受体（tcrαβ）是黄芩苷作用于t细胞的主要受体之一。【关键词】黄芩苷；t细胞受体；tcrvβmrna；实时荧光rt-pcrabstract：objectivetostudytheeffectofbaicalinonthemrnaexpressionoftcrvβonthesurfaceofhumanperipheralbloodtcellsandexplorethepossibl

3、ereceptorforbaicalin.methodstcellsnmethod,anddiuidedintofourgroups:blankcontrolgroup(t1),baicalingroup(t2),antibodyblocking4druggroup(t3)andblockingcontrolgroup(t4).afterincubationfor48h,thetcrvβmrnaexpressionindifferentgroupsefluorescentrt-pcr.results1.thetcrvβe

4、xpressionoft2groupprovethetcrvβexpressionsignificantlyandthetcrαβisoneofthemajorreceptorsforbaicalin　　keyrna;real-timefluorescentrt-pcr　　黄芩是一种唇形科多年生草本植物的干燥根，作为药用已有上千年的历史，其味苦、性寒，具有清热解毒、凉血止血、除热安胎的功效。.其主要活性成分黄芩苷（分子式c21h18o11、分子量446.35）是一种黄酮类化合物，研究发现黄芩苷具有抗病毒［1］，抗炎症［2

5、］，抗肿瘤［3］及免疫调节的作用［4］。其中对黄芩苷免疫调节机制的研究，尤其是抗病毒、抗肿瘤方面的免疫调节机制已成为学者们关注的热点问题之一，但目前的研究大多局限于细胞水平。本实验在本室既往摸索的黄芩苷最佳体外作用浓度及促进t、b细胞体外增殖研究的基础上，从黄芩苷对tcrvβmrna表达的影响入手，结合抗体封闭技术，试图从分子水平上探索黄芩苷作用t细胞表面的可能受体。　　1材料与仪器　　1.1细胞及药品人外周血浓缩白细胞购自江西省血液中心，黄芩苷由江西省中医药研究所提供（纯度＞98%）。　　1.2试剂及仪器鼠抗人tcr（

6、αβ）单克隆抗体（美国bd公司），revertaidtmfirststrandcdnasynthesiskit（mbi公司），trizol试剂、sybrgreenqpcr试剂盒（北京全式金生物技术有限公司），myiq实时荧光定量pcr仪（美国bio-rad公司）。　　1.3qpcr引物由primierprimer5.0软件设计，上海生工生物工程有限公司合成。以β-actin（β-肌动蛋白）为内参基因，序列如下：tcrvβ(xm_001716513)141bpfor_001101)128bpforc，再利用玻璃贴壁法去除单

7、核细胞，最后将收集的淋巴细胞用尼龙毛柱法分离t细胞。洗涤收集的t细胞，用0.2%台朌蓝染色计数细胞活率（≥95%），补体依赖细胞毒实验（cdc）鉴定t细胞纯度（≥90%），最后调整细胞浓度为5×106/ml。　　2.2实验分组按表1分组加样后转种于24孔板上，置37℃5%co2箱培养48h。表1t细胞分组加样表（略）　　2.3总rna提取及鉴定①利用trizol试剂提取总rna。②100v、1%琼脂糖凝胶电泳观察总rna完整性。③紫外分光光度计测定od260/od280，在1.80～2.0之间，说明纯度较好，并计算总rn

8、a的浓度。　　2.4实时荧光定量rt-pcr以5μg总rna为模板按试剂说明书逆转录为第一链cdna，逆转录反应体系为20μl。qpcr反应体系为50μl：cdna1μl、上游引物1μl、下游引物1μl、supermix25μl、sybrgreendye1μl、mg2+2μl补足双蒸水至50μl。每个样本做3个复孔，