桑树总生物碱分析方法与提取方法的探讨

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1、桑树总生物碱分析方法与提取方法的探讨【摘要】　　目的研究桑树总生物碱的分析方法和提取方法。方法采用理化反应和薄层色谱对桑叶生物碱进行定性定量分析。通过对桑树生物碱成分的结构特征的分析设计提取纯化方法。结果发展了桑树生物碱的薄层色谱方法，给出了从桑叶、桑椹、桑白皮和桑枝中提取总生物碱的方法。结论薄层色谱-可见分光光度法可用于桑树总生物碱的定量分析，所提出的总生物碱提取方法具有可操作性。【关键词】桑树；总生物碱；分析方法；提取方法　　Abstract:ObjectiveTostudytheanalysisandextractionmetho

2、dsfortotalalkaloids(MTA)inmulberry.MethodsIdentifyingreactionsandthin-layerchromatography(TLC)forqualitativeandquantitativeanalysisolecularstructuralcharacteristicsforextractionandpurificationschemedesignethodandextractionmethodofFoliumMori,FructusMori,CortexMoriandRamul

3、usMoriinedbyTLC-VISspectrophotometry.ThepreparationprocessofMTAinthisarticleispracticible.　　Keyethod;Extractionmethod大多桑树生物碱成分是野尻霉素(nojirimycin)的衍生物。野尻霉素最早于1965年从玫瑰产色链霉菌R-468(StreptomycesroseochromogenesR-468)的发酵液中分得［1］，1966年被鉴定结构［2］，1967年合成得到1,5-imino-1,5-didesoxy-D-glu

4、cit(即1-脱氧野尻霉素，1-deoxynojirimycin，DNJ)［3］。之后，1976年从桑树(Morusspp.)中分得moranoline(即DNJ)［4］。由于nojirimycin,DNJ具有强的α-葡萄糖苷酶抑制活性［5，6］，因此桑树中的这类哌啶生物碱衍生物一直备受重视。我国桑树资源十分丰富，中药桑叶、桑椹、桑白皮和桑枝均来源于桑树。现在，人们已从桑类药材中发现了多种哌啶生物碱，如表1所示，其中，DNJ是4味药材的共有成分，研究也较多，大多数桑树生物碱成分的结构母核与其相同或类似，具有代表性，其结构如图1所示。表1

5、已发现的桑树生物碱成分（略）从表1、图1可以看出，哌啶型生物碱DNJ及其衍生物结构中含有较多羟基，属氮杂糖类，结构中没有苯环、双键、羰基等发色团，在可见光区和紫外光区都没有吸收，因此定性定量分析都较困难。目前DNJ含量测定方法的思路主要有二，一是将DNJ进行衍生，常用9-fluorenylmethylchloroformate(FMOC-Cl)，因FMOC-Cl有紫外吸收、亦有荧光，所以可用高效液色谱紫外检测［14］或荧光检测［15］或行测定；也可将DNJ乙酰化成为沸点较低的酯类，再采用气相色谱法检测［16］；二是无需衍生，用高效液相色

6、谱-蒸发光检测法(ELSD)直接测定［17］。显然，这些方法不够简便、对仪器要求较高，而且，除非有多种生物碱的对照品，否则无法对总生物碱进行测定。因此，寻找分析多羟基哌啶型生物碱的简便方法十分必要。关于哌啶生物碱单一成分如DNJ的提取、分析的报道较多，但桑类药材总生物碱的分析方法和提取方法却未见报道，本文对此进行了探讨。　　1材料与仪器桑叶总生物碱提取物为市售产品(DNJ含量>50%)。桑叶、桑椹、桑白皮、桑枝药材购于成都荷花池中药材专业市场，经鉴定为Morusalba的干燥叶、果、根皮和嫩枝。硅胶G（青岛海浪化工厂）、732阳离

7、子交换树脂(上海汇珠树脂有限公司)、中性氧化铝(成都市科龙化工试剂厂)、活性炭(成都市科龙化工试剂厂)，其余各种试剂为化学纯或分析纯。TU-1800紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。　　2方法与结果　　2.1桑树总生物碱分析方法的研究实验中以桑叶总生物碱提取物为样品进行了分析方法的研究；后经证实，桑椹、桑白皮和桑枝的总生物碱实验结果与之一致。　　2.1.1检识反应与生物碱沉淀试剂的反应：取桑叶总生物碱提取物适量，加蒸馏水溶解，以盐酸调pH2～3，过滤，所得溶液为浅黄色，取5份，分别与碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、硅钨酸试剂

8、、磷钼酸试剂、苦味酸试剂反应，结果见表2。表2桑叶生物碱的检识反应（略）碘化铋钾、硅钨酸、磷钼酸与样品呈阳性反应，可用于定性鉴别。亚硝酸反应：考虑到DNJ属于脂肪族仲胺，应能与亚硝酸进行反应。试验时取上述桑