脑型肌酸激酶同工酶测定在非心源性疾病的应用

《脑型肌酸激酶同工酶测定在非心源性疾病的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、脑型肌酸激酶同工酶测定在非心源性疾病的应用【摘要】目的探讨脑型肌酸激酶同工酶(CKBB)在肿瘤、自身免疫性疾病的筛查以及器官损伤定位中的意义。方法免疫抑制法检测血清标本心肌型肌酸激酶同工酶(CKMB)、肌酸激酶(CK)活性,计算二者比值。随机选取CKMB/CK>50%的非心源性疾病的血清标本90份及30份对照血清,用CK同工酶琼脂糖凝胶电泳进行分离、鉴定。结果血清CKMB假性增高的标本多见于肿瘤、自身免疫病,经电泳分离及可见光扫描后,肿瘤和自身免疫性疾病组的CKBB含量明显高于对照组,差别具有统计学意义(P<0.01),血清CKB

2、B增高情况与其在组织器官中的分布相符。结论血清CKBB的检测在肿瘤、自身免疫性疾病的辅助诊断以及器官损伤定位中具有重要意义。【关键词】脑型肌酸激酶血清肌酸激酶(CK)及其同工酶的检测是诊断急性心肌梗死(AMI)最具有价值的生化指标之一[12],然而由于方法学的不完善以及其他可引起脑型肌酸激酶同工酶(CKBB)升高的因素,临床上常出现所检测的CKMB活性假性增高的现象,甚至还会出现CKMB活性高于或相当于总CK活性的情况,而且这些患者多为非心源性疾病,如恶性肿瘤、脑出血、自身免疫性疾病、一氧化碳中毒及其他富含CKBB的组织器官损伤等,因此进一步

3、检测这些患者血清中CKBB含量具有重要意义。笔者采用免疫抑制法测定血清CKMB,筛选CKMB/CK>50%的标本,进一步以CK同工酶琼脂糖凝胶电泳分离、鉴定,并经可见光扫描进行定量分析,报告如下。1对象和方法1.1对象2005年3~5月住院病人血清标本4000份,采用免疫抑制法测试从中挑出CKMB/CK>50%的血清标本90份(其中肿瘤组51例,自身免疫病组28例,其他疾病组11例),并经心电图和心脏彩超检查排除心脏严重疾患。其中男性51例,女性39例,年龄(48±15)岁(6~80岁)。对照血清标本30份,均为本院健康体检者(非孕)

4、,年龄(45±11)岁(20~76岁)。肿瘤组、自身免疫病组、其他疾病组和对照组的年龄、性别经统计学处理差别无统计学意义。1.2仪器及试剂全自动生化分析仪(AU2700,日本Olympus公司),SPIFE2000电泳仪及EDC全自动扫描仪(美国GE公司)。CK试剂盒(中生北控生物科技公司);CKMB试剂盒(北京九强生物技术有限公司);SPIFECK同工酶试剂盒(美国Helena公司),包括SPIFECK同工酶凝胶片(10个),SPIFECK同工酶试剂(20×1.5mL),SPIFECK同工酶稀释液(2×0.2mL),REP滤纸C(10片),枸橼酸脱

5、色剂(1包)。1.3方法1.3.1总CK和CKMB活性测定采用全自动生化分析仪检测,并记录CK与CKMB的测定值。1.3.2CK同工酶琼脂糖凝胶电泳加样:在100μL标本中加入的SPIFECK激活剂1μL,混合并在室温下放置10min,加入预先处理过的标本17μL于样品槽内。电泳:在AMP/MOPSO缓冲液浸泡的琼脂糖凝胶上,13℃750V电压下电泳4.5min。加酶试剂:用同工酶稀释液1.5mL复溶1瓶CK同工酶试剂,颠倒混匀,加入底物150μL,将其倒在凝胶片的阳极侧,使试剂均匀平铺于凝胶片表面。孵育:在45℃下孵育20min。脱色与烘干:0.3

6、%枸橼酸脱色剂脱色5min,于63℃下烘干30min。EDC可见光定位扫描并记录CKBB、CKMB的值及一些异常的条带。1.3.3CK同工酶琼脂糖凝胶电泳法试剂可靠性验证试验对CK同工酶电泳试剂和CKMB试剂(中生公司和九强公司)进行可比性分析。依据1/2CKMB%(电泳法)+CKBB%(电泳法)≈1/2CKMB/CK(免疫抑制法)经过120份标本验证CK同工酶电泳法与免疫抑制法所测得B亚基的百分比大致相等。1.4统计学处理计数资料以x±s表示,采用t检验。2结果2.1CK同工酶电泳图谱肿瘤患者与对照组血清CK同工酶电泳图谱比较见图1。2.2

7、EDC可见光扫描图像肿瘤患者血清CKBB成分明显增多(图2)。2.3免疫抑制法检测CKMB/CK>50%的90份标本中,肿瘤组51份占56.7%,自身免疫病组28份占31.1%,其他疾病组11份占12.2%。经CK同工酶电泳分离后,CKBB测定结果见表1。表1各疾病组的CKBB水平2.490份标本中CKBB的组织含量>60%标本43份,<50%标本29份,经CK同工酶电泳所得CKBB的测量值分别为[(26.76±8.56)vs(19.28±6.32),P<0.01]。3讨论免疫抑制法测定CKMB活性的原理是,通过抗C

8、KM抗体抑制M亚基的活性,测定B亚基的活性,正常血清中CKBB含量极微[3]