口腔义齿基托有机无机杂化涂层抗菌性能测定

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1、口腔义齿基托有机无机杂化涂层抗菌性能测定吉林大学口腔医学院虞鹏飞2012级一、实验目的研究有机无机杂化涂层树脂基托对口腔2种常见致病菌的抗菌性。二、实验材料主要药品:甲基丙烯酸甲酯(MMA)，化学纯;甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA);丙烯酸(AA)，化学纯;偶氮二异丁睛(AIBN);γ-缩水甘油醚基丙基三甲氧基硅烷(KH560);正硅酸乙酯(TEOS)，冰醋酸(HAc)，乙二醇乙醚(EGME)，2一甲基咪哩，均为分析纯;去离子水。PMMA基片由美利登牌基托树脂按照说明书进行制备。六亚甲基二异氰酸酯(HDI)，分析纯;不同分子量的聚乙二醇(PEG1000和PEG-2000

2、)，化学纯;甲苯，无水乙醇，分析纯。二丁基二月桂酸锡。白色念珠菌ATCC10231，变形性链球菌ATCC25175，沙堡氏培养基，轻唾培养基，厌氧培养罐。聚乙烯薄膜，义齿基托树脂(I型)、义齿基托树脂液剂(I型)。实验仪器:红外光谱仪，等离子体清洁机，接触角测试仪，超净工作台，电热恒温培养箱，无油真空泵。三、实验方法1.有机杂化硅溶胶制备首先将正硅酸乙酯，乙二醇乙醚，去离子和冰醋酸混合，置于400°C的水浴中，搅拌1.5小时。随后，将γ-缩水甘油醚基丙基三甲氧基硅烷滴加到上述溶液中，然后将水浴温度升至600°C，搅拌6小时。溶液自然降温至室温后陈化1天，得到有机杂化硅

3、溶胶。2.有机聚合物涂料的制备将4.26g(0.03mol)甲基丙烯酸缩水甘油酯，2.16g(0.03mol)丙烯酸，9.0g(0.09mol)甲基丙烯酸甲酯和147g乙二醇乙醚混合均匀，加到250mL四口烧瓶中，架设在油浴上，安装好机械搅拌装置，冷凝回流装置，通氮气的针头，开动搅拌。先向体系内通氮气约15分钟，赶走体系内的空气，然后将油浴升温至700C。待温度示数稳定后，将0.10gAIBN溶解在约3g的乙二醇乙醚中，注射到体系中，引发聚合。10小时后停止加热，让体系自然降温到室温，然后停止搅拌和氮气。有机物涂料不作进一步处理，直接用于制备涂层。3.有机-无机杂化涂

4、层的制备各取一定量的聚合物涂料和有机杂化硅溶胶，在700°C下烘干，称取所剩的固体质量，计算得到各自的固含量。将聚合物涂料与有机杂化硅溶胶以不同的固含量比例混合，加入涂料总固含量质量百分之一的2-甲基咪哩作为环氧固化剂，在室温下搅拌12小时后，将涂料刷涂到PMMA基片上，室温下悬挂晾干。然后将基片放在烘箱中700°C烘30分钟，再升温至1000C，继续烘2小时。21.制备菌液将菌种ATCC10231(白色念珠菌)的菌株经活化，鉴定，传2～3代后，用接种环取1～2环第3～8代的白色念珠菌菌落加入沙堡氏液体培养基中，配成浓度为1×108cfu/ml的标准菌悬液，用培养液1

5、0倍稀释该菌悬液，使用比浊法配制成浓度为1×105cfu/ml的菌悬液备用。2.接种菌液把0～6号试件分别放入无菌平皿内，吸取0.2m1的白色念珠菌的菌液分别滴加至试件表面，每个试件应做三个平行组。用无菌镊子将覆盖膜盖在试件表面并将其铺平，应使菌液均匀接触试件并不产生气泡。盖好平皿并在相对湿度为90%温度为37°C±1°C的条件下培养24小时。另取一个空白对照试件，在其上加0.2m1无菌沙堡氏培养基，并覆盖无菌薄膜，置于无菌平皿内同样环境培养24小时，作为阴性对照组。6.平板菌落计数在已经接触培养24h的平皿内分别加入20m1无菌洗脱液，反复洗脱三次样品和覆盖膜，然后

6、把洗脱液移至三角烧瓶中摇匀，经过适当稀释，把每个样液平行接种1ml至2个平皿，然后倾注45°C～～55°C已融化的沙堡氏琼脂培养基，待培养基凝固后翻转平板，将平板放入37°C±1°C的恒温培养箱中，待培养24小时之后，做活菌培养计数。以上实验应重复三次，求平均值。四、结果与讨论为了测试杂化涂料的抗菌性，同样使用了白色念珠菌和变形性链球菌，利用贴膜法，测试了不同掺杂量的杂化涂料对以上两种微生物的抑菌率。按照抗菌率的计算公式:r（%)=(b-c)/b×100%对实验结果进行了统计，(其中r为抗菌率，b为空白对照样本平均回收菌数，c为添加抗菌剂的涂料样本平均回收菌数)，结果

7、如下表所示。表中统计数据显示，本研究合成的涂料具有良好的抗菌性能。在较低剂量的抗菌剂掺杂下，涂料就有了较高的抑菌率。抑菌率的结果证明了随着抗菌剂掺杂量的增多，涂料抗菌性能也有所增强。掺杂量白色念珠菌变形链球菌0%001%97.3%95.7%2%99.8%99.2%4%100%100%2