人白蛋白残留铝离子会计师测定铝试剂法

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人白蛋白残留铝离子会计师测定铝试剂法1　试剂1.1　盐酸（1∶9）10ml浓盐酸加90ml蒸馏水。1.2　0.2%铝试剂溶液0.2g铝试剂加100ml蒸馏水溶解。1.3　10%醋酸铵溶液称取10g醋酸铵（AR），加蒸馏水溶解并稀释至100ml。1.4　准铝溶液（10μg铝/ml）精密称取明矾[KAl（SO4）2·12H2O]（AR，无风化）0.3518g，加1.5mol/l　HCl8ml，加蒸馏水到500ml，为40μg铝/ml的标准浓溶液。临用时精确量取2.5ml标准铝浓溶液于10ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，为10μg铝/ml标准液。1.5　4mol　/L　NaOH溶液称取40g　NaOH(A.R)，加蒸馏水溶解并稀释至250ml。1.60.5mol　/L　NaOH溶液

1取50ml　4mol　/L　NaOH加蒸馏水至400ml。1.70.1mol　/L　HCl溶液1ml浓HCl（A.R）加蒸馏水至120ml。取溴麝香草酚蓝0.1g,加0.05mol/L　NaOH3.2ml,溶解，再加水衡稀释至200m。2　操作2.1样品精密量取1ml样品于凯氏消化瓶内，加1ml浓H2SO4于电炉上消化。从浓的白烟生成到白烟基本消除，再继续消化15分钟，稍冷，向消化瓶中另入适量H2O2，于电炉上继续消化至无气泡生成，消化液呈无色透明。待冷后，用4mol/LNaOH中和消化液（10%白蛋白加5ml4mol/LNaOH）。然后将消化液转移至10ml容量瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度。

2取2ml稀释液于25ml带塞比色管中（取2管）。另取2ml稀释液于50ml三角烧瓶中，向三解烧瓶中加2滴BTB指示剂，如变蓝，用0.1mol/LHCl滴定至黄绿色；如为黄色就用0.5mol/LNaOH滴定至黄绿色或浅蓝色。用此方法将2ml样品或对照稀释液的pH值调至5.5~8.5，按此量将比色管内的稀释液pH值调至5.5~8.5。加1mlHCl(1∶9)，加蒸馏水使其总体积不超过17ml，加0.2%铝试剂1ml、10%醋酸铵溶液5ml，加蒸馏水至25ml。加塞摇匀。放置20分钟后，用530nm波长测其吸收度（OD值）。同时做空白对照，用1ml蒸馏水代替1ml样品，其余操作同样品。2.2　标准曲线精密量取标准铝溶液（10μg铝/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于25ml带塞比色管中，铝含量分别为0、2、4、6、8、10μg，从加1mlHCl（1∶9）起同样品管。3　计算3.1　由标准曲线查出，或从标准计算出的直线回归方程中求出对照管和样品管的铝含量（A）。3.2　根据中和用去的碱量计算出2ml样品和对照稀释液中含4mol/LNaOH的ml数。3.3　根据2ml对照稀释液含的4mol/l　NaOH量和含铝量，计算出每ml4mol/l　NaOH含铝量。3.4　根据每ml4mol/l　NaOH含铝量和2ml样品稀释液中含4mol/l　NaOH的ml数，计算出2ml样品稀释液中，中和用的4mol/l　NaOH含铝量（B）。

33.5　计算样品中含铝量样品中含铝量（μg/g蛋白）=[（A－B）÷2×10]÷蛋白含量（g/ml）附注1．铝试剂不仅能与某些金属离子形成有色的络合物，同时也会由于溶液中H+浓度的改变而产生颜色的变化。因此测定时，要严格控制溶液的pH值在5.0左右，样品和标准的pH值一致。2．铝试剂避光保存。人白蛋白（或丙种球蛋白）纯度测定（醋酸纤维素薄膜电泳法）1试剂1.1　巴比妥缓冲液（Ph8.6）取巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，加蒸馏水溶解成1000ml。1.20.5%氨基黑染色液取氨基黑10B0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及蒸馏水40ml的混合液中。1.3漂洗液

4取乙醇45ml，冰醋酸5ml及蒸馏水50ml，混匀。1.40.2mol　/L氢氧化钠取8g氢氧化钠，加蒸馏水溶解成1000ml。1.5透明液取冰醋酸25ml，加无水乙醇75ml，混匀。2　操作2.1电泳将膜条（2×8cm）粗糙面向下，浸入巴比妥缓冲液中，待完全浸透，取出用滤纸吸去多余的缓冲液，将膜条粗糙面向上，加于电泳支架上的滤纸桥上（或桥下），于膜上距负极端2cm处，直线状滴加蛋白质含量约5%的样品2～3μl，通电，电流控制在0.4~0.6mA/cm[总电流量=生产要膜的宽度（cm）×膜条数]，同时取新鲜人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离达3～4cm为宜。2.2　染色电泳完毕，将膜条取下浸于染色液中，2～3分钟后，用漂洗液反复漂洗至底色完全脱净。2.3　透明

5将漂净并完全干后的膜条浸于透明液至全部浸透为止，取出平铺于洁净的玻璃板上，干后即成透明薄膜，可供扫描法测定样品纯度和作为标本长期保存用。2.4　纯度测定2.4.1　洗脱法：将漂洗净的膜条用滤纸吸干，与正常人血清的电泳图谱作对照，剪下白（或丙种球蛋白）带A及其他杂蛋白质区带B，分别浸于5ml0.2mol/L氢氧化钠溶液中，振摇数次，至色泽完全浸出后，于620nm波长下测其OD值，以相同条件下，无蛋白质部分的膜条（其长度分别同A及B）作空白对照。样品中白蛋白（或丙种球蛋白）含量%=A的OD值－A空白的OD值/（A的OD值－A空白的OD值）+（B的OD值－B空白的OD值）×100%2.4.2　扫描法：将干燥的样品醋酸纤维素薄膜电泳图谱放入自动光密度扫描仪，通过反射（未透明薄膜）或透射（已透明薄膜）方式测定各蛋白质电泳区带的OD值，根据仪器性能，可自动或手工方法计算出样品白蛋白（或丙种球蛋白）的百分含量。附注用扫描法测定白蛋白（或丙种球蛋白）纯度时，可采用丽春红染色法，其染色液及漂洗液配方如下：

60.2%红染色液：取丽春红0.2g，磺基水杨酸3g及三氯醋酸3g，用蒸馏水溶解并稀释至100ml。漂洗液：取冰醋酸3ml，用蒸馏水稀释至100ml。