Gallios 每日开机程序

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1、高端流式细胞仪Gallios操作规程BeckmanCoulter厦门大学医学院中心实验室黄霄红2016年12月Gallios操作规程注意：重新开机前先确认是否已经关机30分钟以上，以保护激光器。一、开机前检查1.检查鞘液桶并确认：外置鞘液桶是否充足，需充满1/3以上鞘液，鞘液为加有万分之一NaN2的超纯水。旋紧外置和内置鞘液桶盖子，管路与桶盖连接，无扭曲。2.检察废液桶并确认：及时清空废液桶，可酌情在废液桶内加入少量次氯酸钠原液，旋紧废液桶盖子，管路与桶盖连接，无扭曲。3.检查清洗液桶，确认加满清洗液。二、开机1.开启液流车电源箱开关，

2、启动计算机。2.在出现的Window窗口对话框中输入用户名（adminstrator）和密码（password）。3.点击桌面，此时405nm、488nm、635nm激光器自动开启，如实验需要561nm激光器，可在仪器后方打开该激光器的电源。点击（工作站）图标，在用户登录对话框中，选择登陆的用户名service1，输入密码service5(密码会定期更换)，点击“Next”。4.下一窗口，点击“Connect”，启动流式细胞仪。注意：如流式细胞仪重新启动后，再次关机必须等待30分钟以上，以保护激光器。5.打开电源箱门，做如下检查：AIR

3、FILTER,VACUUMFILTER必需干燥无水；WATERTRAP液体不能超过1/3；VACUUMTRAP液体不能超过1/4；检查SYSTEMVACUUM表，确认在-17~-30in.Hg；检查SYSTEMPRESURE表，确认在28~32PSI之间。注意：如SYSTEMPRESURE表计数不在上述范围内，拉出PRESUREADJUSTER钮，调节压力至30±2，将按钮复位。（第5条一般由仪器管理员每天检查）6.激光预热10-15分钟，观察流式细胞仪主机前的指示面板，“STATUS”指示灯变为绿色如图标示，且软件提示“Awaitin

4、gSample”，执行Prime，排除管路气泡后，既可以开始检测标本。三、检测标本以人双色淋巴细胞亚群为例，介绍Gallios流式细胞仪检测双色样本流程。1.实验试剂：单克隆荧光抗体：①Isotypecontrol（IgG1-FITC/IgG1-PE）；②CD3-FITC/CD19-PE;③CD3-FITC/CD4-PE;④CD3-FITC/CD8-PE;⑤CD3-FITC/CD16+56-PE。红细胞裂解液：即用型，室温保存（18-25℃）；0.01MPBS；Immunotrol质控血或者EDTA抗凝血。2.样本制备：A取5支流式试管

5、，编号为1、2、3、4、5，分别将100μl抗凝全血或Immunotrol质控血加入1-5号试管中，小心不要将血挂在试管内壁上；B在各管中依次加入20μl的IgG1-FITC/IgG1-PE、CD3-FITC/CD19-PE、CD3-FITC/CD4-PE、CD3-FITC/CD8-PE、CD3-FITC/CD16+56-PE，涡旋混匀后，室温避光孵育20分钟；C取出试管，每管加入500μl红细胞裂解液OptiLyseC，涡旋混匀，室温避光10分钟；300g（约1200rpm）离心5min，弃去上清液；D每管加入2ml的PBS，涡旋混匀

6、，300g离心5min，弃去上清液；E每管加入0.5mlPBS混匀，4℃避光1h内上机检测；若不能及时上机，加入0.5ml含1-2%多聚甲醛的PBS溶液，置于4℃冰箱保存，24h内上机检测。3.建立双色方案：A选择“File”“New”“NewProtocol”B选择参数：点击工具栏中的“CytometerControl”键，选择“Acq.Setup”选项卡，点击“Parameters…”进入参数选择对话框，依实验选择所需的参数，点击“OK”，为方案选择保存路径，命名为“2CLymIsotype.pro”本实验所选参数为FS-INT-L

7、IN；SS-INT-Lin；FL1-INT-Log；FL2-INT-Log。C建立该实验方案所需图形：本实验需要二个图（请同学们思考：不同的实验目的需要几幅数据显示图，怎样组合双参数散点图）①SS/FS双参数点图：单击工具栏中的（ColorDotPlot）键，X轴选择“SSINTLIN:SSINTLIN”,Y轴参数选择“FSINTLIN:FSINTLIN”，Gate参数选择“Ungated”，如需在图形中直接显示细胞相对百分含量，可在“Show%onplot前的方框中打“√”，如下图。单击OK。单击（PolygonalRegion）键，

8、在FS/SS点图中画多边形门A，用来圈定淋巴细胞。②FL1/F2双参数散点图：单击工具栏中的（ColorDotPlot）键，X轴参数选择“FL1INTFL1LOG”,Y轴参数选择“FL2INTFL2LOG”