半夏蛋白的提取分离、含量测定及对hela细胞的作用研究

《半夏蛋白的提取分离、含量测定及对hela细胞的作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期：年月曰國

2、

3、關»

4、

5、

6、Y2051745保密，在学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权浙江理工大学可以将本学位论文的全部或部分内

7、容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。年解密后使用本版权书。本学位论文属于指导教师签名：日期:>0

8、辟月日学位论文作者签名:碎it日期3月IAfQ不保密理4义凌硕士学位论文半夏蛋白的提取分离、含量测定及对Hela细胞的作用研究作者姓名冯瑞娟学科(专业）生物化学与分子生物学指导老师檢涛副教授所在学院生命科学学院提交日期年中国杭州浙江理工大学硕士学位论文浙江理工大学硕士学位论文ZHEJIANGSCI-TECHUNIVERSITYMASTERDISSERTATIONExtraction,Isolation

9、,AssayingofPinellinandItsEffectonHelaCellRuiJuanFengDirectedbyDr.TaoXu,viceprofessorCollegeofLifeSciences,ZhejiangSci-TechUniversityMar.,2012HANGZHOU,CHINA分^^号：密级:UDCf半夏蛋白的提取分离、含量测定及对Hda细胞的作用研究浙江理工大学硕士学位论文论文答辩日期答辩委员会主席jcj4-川论文评阅人；答辩委员会成员後傳浙江理工大学硕士学位论文课题来源国家自然科学基金(30772712)浙

10、江理工大学硕士学位论文搞要半夏(?/«^///a/mia,a(Thunb.)Breit.)为天南星科半夏属植物，是我国传统的中药材，具有燥湿化疲，降逆止呕，消痛散结的功效。主要活性成分有留醇、生物碱、活性多糖、氧基酸、有机酸和凝集素等。其中，半夏凝集素是半夏总蛋白的主要成分之一*近年来的研究发现，半夏蛋白具有多种生物活性，是半夏抗虫、抗肿瘤及抗生育的主要有效成分，成为半夏研究的热点。本文的研究内容是半夏总蛋白及半夏凝集素，主要包括半夏总蛋白的动态变化及半夏凝集素对Hela细胞的生长的影响。本研究采用4种常用的总蛋白质提取方法(丙翻沉淀法、95

11、%(NH4)2S04盐析法、TCA-丙嗣法和Tris-饱和臉法)，同等条件下分别提取半夏总蛋白质，对其进行十二炼基硫酸纳-聚丙炼酸胺凝胶(SDS-PAGE)电泳，电泳结果显示：四种方法提取的总蛋白电泳行为无明鼠差导。采用Bradford浙江理工大学硕士学位论文蛋白含量测定试剂盒测定总蛋白含量，四种方法提取的总蛋白含量结果为：TCA-丙銅法(1.082mg/ml)>95%(NH4)2S04盐析法(0.678mg/ml)>Tris-饱和粉法(0.493丙飼法(0.369mg/ml),比较分析发现TCA-丙雨法提取半夏总蛋白效果最佳。利用TCA-丙

12、爾法分别提取半夏不同生长时期(出芽期、全苗期、珠芽期、佛焰范期及倒苗期)采集到的样品总蛋白质,SDS-PAGE电泳检测及Bradford蛋白含量测定试剂盒测定半夏不同生长时期总蛋白质含量。其中，不同时期采集到的样品分为新鲜和千燥处理两组。SDS-PAGE电泳结果比较分析发现：新鲜组样品中，不同生长时期的总蛋白成分有差异；新鲜组样品多千燥处理组样品10条蛋白带，且干燥处理组样品中出现了新鲜组样品中没有的蛋白条带(如表观分子量为26kDa和35kDa的蛋白),而表观分子量为12kDa和24kDa的蛋白成分在两个处理及各个生长时期中占的比例均较大。

13、含量测定结果为：新鲜半夏不同生长时期中，块莲中总蛋白含量变化表现为倒苗期>佛焰苟；期>出芽期>珠芽期>全苗期；不同生长时期干燥处理半夏中，块基中总蛋白含量变化表现为倒苗期>珠芽期>出芽期>佛焰箱期>全苗期。含量测定结果显示倒苗期总蛋白含量最高，全苗期总蛋白含量最低。结果表明，半夏不同生长时期总蛋白成分发生了一定变化，同一蛋白成分在不同的生长时期含量有差异，新鲜和干燥处理样品中蛋白含量和种类也有一定差异。同时，本实验室根据半夏凝集素的甘露糖专一结合的性质，设计制备了甘露糖-Sepharose4B凝胶，从半夏总蛋白中成功分离純化出一种半夏凝集素，

14、SDS-PAGE凝胶电泳检测，表观分子量为12kDa,纯度达到电泳纯，研究表明该凝集素是一种糖蛋白，能凝集小鼠红细胞。用不同浓度(0.004mg/mL、0.02mg