his融合蛋白提取方法

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1、His融合蛋白的提取方法1.取20mL冻存菌液加到2mlLB(Amp+)，37℃,225rpm,16h2.从这2mL中取出1mL到400mLLB(Amp+),37℃,225rpm,8h3.加IPTG诱导，终浓度（0.2mM）24℃,140rpm,16h4.离心收菌4℃3000rpm10min5.弃上清，菌体用lysisbuffer重悬（400mL菌液离出的沉淀大概加20mL-30mLlysisbuffer）6.冰上超声，超到清透。7.离心，4℃,13000rpm,30min,上清转移到50mL尖底离心管

2、。8.用Washbuffer洗beads3000rpm,2min4times（固体beads实际体积500μM）9.把洗好的beads加到7步的上清中,4℃，静音混合器，孵育1h10.离心，4℃5000rpm,6min,拿出后静置2min，用吸泵去上清11.wash4times:beads转移到5mL离心管，每次加满washbuffer,4℃，静音混合器，10min,4℃4000rpm3min离心。最后一次用0.5mLwashbuffer转移到1.5mL管，再离心去上清。12.洗脱：beads加500μ

3、Lelutionbuffer，4℃，静音混合器，20min,4℃4000rpm3min,上清即蛋白，重复2-3次，测浓度。Lysisbuffer:PH8.050mMTris150mMNaCl+10mM咪唑+1mMPMSFWashbuffer:PH8.050mMTris150mMNaCl+20mM咪唑+1mMPMSFElutionbuffer:PH8.050mMTris150mMNaCl+250mM咪唑+1mMPMSF