组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中

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1、组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒是一种旨在使用乙醛脱氢酶2敏感性抑制剂，通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）还原后峰值的增高，即采用比色法来测定组织裂解萃取液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体等）乙醛脱氢酶2的特异活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景乙醛脱氢酶（aldehydedehydrogenase；ALDH；EC1

2、.2.1.3），又称为乙醛NAD氧化还原酶（aldehydeNAD-oxidoreductase）是一类NAD（P）依赖性酶，催化广谱的外源性或内源性脂肪族和芳香族乙醛类底物氧化，包括乙醇、氨基酸、生物胺（biogenicamine）、维生素、固醇类、脂质、药物和环境分子等代谢产物。乙醛脱氢酶是乙醇在体内分解代谢过程中两种主要酶之一。乙醛脱氢酶把乙醛中的两个氢原子脱掉，使乙醛转化为乙酸，生成的乙酸进入脂肪酸氧化途径，最终被氧化成二氧化碳和水。乙醛脱氢酶主要有两种同工酶：ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中

3、，ALDH2存在于线粒体中，ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脱氢酶的缺少，使酒精不能被完全分解为水和二氧化碳，而是以乙醛继续留在体内，使人喝酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等醉酒症状。基于来自于乙醇代谢产生的乙醛（acetaldehyde），在7-羟基-3-（4-羟苯基）-异黄酮-7-糖苷（Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside；Daidzin）存在与否的情况下，由乙醛脱氢酶2的催化作用，转化为乙酸（aceticacid）产物后，通过测定反应体系中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized

4、reducednicotinamideadeninedinucleotide；NAD）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）的变化（340nm波长），来定量分析乙醛脱氢酶2的特异活性。乙醛脱氢酶2反应系统为：产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升缓冲液（ReagentC）毫升反应液（ReagentD）毫升底物液（ReagentE）毫升阴性液（ReagentF）毫升专性液（ReagentG）微升产品说明书

5、1份保存方式5保存缓冲液（ReagentC）、反应液（ReagentD）、底物液（ReagentE）和专性液（ReagentG）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（ReagentD）和底物液（ReagentE）避免光照；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品保存的容器15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器（微型）台式离心机：用于样品制备比色皿或酶标板：用于比色的容器分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤一、样品准备1．手术取出动物组织，并秤重500毫克2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离

6、心管3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（ReagentA）清洗4．（选择步骤）抽去清理液5．移入到一个液氮冻存管6．即刻放进液氮罐过夜7．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）8．放进一个15毫升锥形离心管9．加入置于冰槽里的xx微升裂解液（ReagentB）10．强力涡旋震荡30秒，充分混匀11．放进冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）12．即刻放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为10000g13．小

7、心移取上清液到新的无菌的1.5毫升离心管14．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）15．放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用二、测定准备1．开启并设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长340nm，间隔60秒，读数5次（共5分钟），并置零2．从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；底物液（ReagentE）避免光照；缓冲液（ReagentC）置于室温下均衡温度三、背景对照测定1．移取xx微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿51．加入xx微

8、升反应液（ReagentD）2．加入xx微升底物液（ReagentE）3．在25℃温度下孵育3分钟4．加入xx微升阴性液（ReagentF）5．上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）6．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（5分钟读数－0分钟读数）一、样品总活性测定1．移取xx微升缓冲液（ReagentC）到新的比色皿2．加入xx微升反应液（ReagentD