高效液相色谱法

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仪器分析练习题（二）——高效液相色谱法部分一、选择题1.分离一组高聚物（分子量>2000）时最宜采用的色谱方法是（D）A.气固色谱B.反相键合相色谱C.离子交换色谱D.凝胶色谱2.Si-O-Si-C型的18烷基固定相可用于（B）A.正相色谱B.反相色谱C.离子交换色谱D.空间排阻色谱3.反相离子对色谱法分离试样组分时，随着对离子浓度的增大，组分的保留时间（A）。A.增大B.减小C.不变D.不能确定4.下列试剂中可作为正相色谱流动相的是（CD）。A.水B.甲醇C．乙腈D.正已烷5.在惰性担体表面健合上基团-SO一后的离子交换树脂称为（B）。A．强碱性阳离子交换树脂B.强酸性阳离子交换树脂C.强碱性阴离子交换树脂D.强酸性阴离子交换树脂6.分离一组高沸点的物质时最宜而是采用的色谱方法是（D）。A.气液色谱B.气固色谱C.毛细管气相色谱D.液相色谱7.应用正相色谱法分析一组组分时，组分的出峰顺序为（A）。A.极性小的组分先出峰B.极性大的组分先出峰C.分子量小的先出峰D.分子量大的先出峰8.火焰光度检测器是（C）检测器。A.通用型、质量型B.通用型、浓度型C.选择型、质量型D.选择型、浓度型9.梯度洗脱适用于下列哪种色谱分析方法是（C）。A.气液色谱B.液液分配色谱C.凝胶色谱D.反相键合相色谱10.下列试剂中最适宜作为反相色谱流动相的是（A）。A.甲醇水B.环已烷C．四氯化碳D.正已烷11.在惰性担体表面健合上基团—NR+后的离子交换树脂称为（C）。A．强碱性阳离子交换树脂B.强酸性阳离子交换树脂C.强碱性阴离子交换树脂D.强酸性阴离子交换树脂12.分离一组难挥性、可离解的物质时最宜而是采用的色谱方法是（C）。A.气液色谱B.正相色谱C.离子交换色谱D.气固色谱）。13.应用反相键合相色谱分离R-CH、R-COO成R-COCH（R为一长碳链）时出峰顺序为（AA.R-COOH、R-COCH3、R-CH3B.R-CH3、R-COCH3、R-COOH、C.R-COCH3、R-COOH、R-CH3D.R-CH3、R-COO、HR-COCH3 13.离子交换色谱法通常以（C）为流动相的主体。A.正已烷B.环已烷C.水D.甲醇14.分离一组蛋白质时，最宜采用的色谱方法是（D）。A.气固色谱B.反相键合相色谱C.离子交换色谱D.凝胶色谱15.正相离子对色谱法分离试样组分时，随着对离子浓度的增大，组分的保留时间（B）。A.增大B.减小C.不变D.不能确定16.离子交换色谱法分离柠檬酸离子、Br；HCOO、OH一时，滞留次序为（A）。A.柠檬酸离子>Br->HCOO>OH一B.柠檬酸离子99.99%。四、名词解释1.梯度洗脱：流动相中含有两种或更多不同极性的溶剂，在分离过程中按一定的程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中极性的变化改变被分离组分的容量因子k和选择因子，一提高分离效果。2.电泳：在外加电场的影响下，带电胶体粒子或离子在分散介质中作定向移动的现象称为电泳。五、简答题1.简述高效液相色谱仪的基本结构，并各举例1〜2个常用部件说明。答：高效液相色谱仪基本上由输液系统、进样系统、色谱分离系统和检测记录系统等部分组成。输液系统包括贮液瓶、过滤器、脱气装置、高压泵、梯度洗脱装置、混合室、压力表和阻尼器进样系统包括进样口、注射器或进样阀等；HPLC色谱分离系统包括色谱柱、，f亘温器、连接管等，是HPLC的核心。检测系统常用得是电导检测器，紫外光度检测器等。2.液相色谱的梯度洗提与气相色谱中的程序升温有何异同之处？。答：在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的组成或浓度配比，称为梯度洗提.是改进液相色谱分离的重要手段.梯度洗提与气相色谱中的程序升温类似，但是前者连续改变的是流动相的极性、pH或离子强度,而后者改变的温度.程序升温也是改进气相色谱分离的重要手段.3.从分离原理、应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。答：二者都是根据样品组分与流动相和固定相相互作用力的差别进行分离的。从仪器构造上看，液相色谱需要增加高压泵以提高流动相的流动速度，克服阻力。同时液相色谱所采用的固定相种类要比气相色谱丰富的多，分离方式也比较多样。气相色谱的检测器主要采用热导检测器、氢焰检测器和火焰光度检测器等。而液相色谱则多使用紫外检测器、荧光检测器及电化学检测器等。但是二者均可与MS?联用。二者均具分离能力高、灵敏度高、分析速度快，操作方便等优点，但沸点太高的物质或热稳定性 差的物质难以用气相色谱进行分析。而只要试样能够制成溶液，既可用于HPLC分析，而不受沸点高、热稳定性差、相对分子量大的限制。1.简述HPLC43降低板高，提高柱效的方法。答：减小填料粒度是提高柱效的最有效途径；用低粘度溶剂作为流动相；减小填料孔穴深度及增大孔径；④采用适当低的流速；⑤提高柱温，降低流动相粘度。2.液相色谱有几种类型？写出其中三个的保留机理答：液相色谱有以下几种类型：液-液分配色谱；液-固吸附色谱；化学键合色谱；离子交换色谱；离子对色谱；空间排阻色谱等。其中；液-液分配色谱的保留机理是通过组分在固定相和流动相间的多次分配进行分离的。液-固吸附色谱是通过组分在两相间的多次吸附与解吸平衡实现分离的。化学键合色谱中由于键合基团不能全部覆盖具有吸附能力的载体。④离子交换色谱和离子色谱是通过组分与固定相间亲合力差别而实现分离的。⑤离子对色谱色谱中，样品组分进入色谱柱后，组分的离子与对离子相互作用生成中性化合物，从而被固定相分配或吸附进而实现分离的。⑥间排阻色谱是利用凝胶固定相的孔径与被分离组分分子间的相对大小关系，而分离、分析的方法。（以上六种任选三种）3.简述HPLC法所使用的化学键合固定相的优点。答：固定相表面没有液坑，比一般液体固定相传质快的多；无固定相流失，增加了色谱柱的稳定性及寿命；可以键合不同的官能团，能灵活地改变选择性，可应用与多种色谱类型及样品的分析；④有利于梯度洗提，也有利于配用灵敏的检测器和微分的收集；8.简述HPLC分析时选择流动相应注意的因素。答：流动相纯度，一般采用色谱纯试剂，必要时需进一步纯化，以除去有干扰的杂质。应避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂。对试样要由适宜的溶解度，否则在柱头易产生部分沉淀。④溶剂的黏度小些为好。⑤应与检测器相匹配。9.简述影响高效液相色谱法塔板高度变化的主要因素。答：当流动相得线速度大于0.5cm•s-1时，纵向扩散项对塔板高度的变化是可以忽略的。流动的流动相中的传质阻力项影响塔板高度是与线速度u和固定相粒度dp的平方成正比,与试样分子在流动相中的扩散系数Dm＜反比。 柱温，流动相的黏度等（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）