最新实验10脂质体的制备ppt课件.ppt

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1、实验10脂质体的制备一、      实验目的1、掌握薄膜分散法制备脂质体的工艺。2、掌握用阳离子交换树脂测定脂质体包封率的方法。3、熟悉脂质体形成原理，作用特点。4、了解“主动载药”与“被动载药”的概念。二、实验原理脂质体是由磷脂与(或不与)附加剂为骨架膜材制成的，具有双分子层结构的封闭囊状体。常见的磷脂分子结构中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。将适量的磷脂加至水或缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂质体。对于脂溶性的、与磷脂膜亲和力高的药物，“

2、被动载药”法较为适用。而对于两亲性药物，其油水分配系数受介质的pH值和离子强度的影响较大，包封条件的较小变化，就有可能使包封率有较大的变化，首选“主动载药”方法。下图为“主动载药”中pH梯度法载药原理示意图H+H+DDDH+DH+insideacidpHoudsideneutralpH评价脂质体质量的指标有粒径、粒径分布和包封率等。其中脂质体的包封率是衡量脂质体内在质量的一个重要指标。常见的包封率测定方法有分子筛法、超速离心法、超滤法等。本文采用阳离子交换树脂法测定包封率。“阳离子交换树脂法”是利用离子交换作

3、用，将荷正电的未包入脂质体中的药物(即游离药物)，如本实验中的游离小檗碱，通过阳离子交换树脂吸附除去，包封于脂质体中的药物(如小檗碱)，由于脂质体荷负电荷，不能被阳离子交换树脂吸附，从而达到分离目的，用以测定包封率。示意图见下图。Na+SO-3Na+SO-3Na+SO-3Na+SO-3Ber+Ber+Ber+Ber+Ber－－－－－－－－－－－－三、实验内容（一）实验材料与设备1.实验材料：盐酸小檗碱、注射用大豆卵磷脂、胆固醇、无水乙醇、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、NaHCO3、阳离

4、子交换树脂。2.实验设备与仪器：旋转蒸发仪、烧瓶、恒温水浴锅、磁力搅拌器、吸耳球、光学显微镜、玻璃棉、5ml注射器筒、0．8m微孔滤、紫外分光光度仪、溶量瓶等。（二）实验部分1．空白脂质体的制备（用于测定柱分离度用）【处方】注射用大豆卵磷脂0.9g胆固醇0.3g无水乙醇2-20m1磷酸盐缓冲液适量制成约30m1脂质体【制备】（1）磷酸盐缓冲液（PBS）的配制称取磷酸氢二钠（Na2HPO4﹒12H2O）0.37g与磷酸二氢钠（NaH2PO4﹒2H2O）2.0g,加蒸馏水适量，溶解并稀释至1000ml（pH约为

5、5.7）。（2）称取处方量磷脂、胆固醇于100ml（也可以是250ml、500ml或1000ml）烧瓶中，加无水乙醇1-2ml（根据情况可以加10ml或20ml），置于65-70℃水浴中，搅拌使溶解，于旋转蒸发仪上旋转，使磷脂的乙醇液在壁上成膜，减压除乙醇，制备磷脂膜。（3）另取PBS30ml于小烧杯中，同置于65-70℃水浴中，保温，待用。（4）取预热的PBS30ml，加至含有磷脂膜的烧瓶中，65-70℃水浴中搅拌水化10-20min。取出脂质体液体于烧杯中，置于磁力搅拌器上，室温下，搅拌30-60min，

6、如果溶液体积减少，可补加水至30m1，混匀，即得。（整个过程也可在旋转蒸发仪上完成，其它的脂质体制备也可在旋转蒸发仪上完成。）（5）取样，在油镜下观察脂质体形态，画出所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体的粒径；随后将所得脂质体溶液通过0.8m微孔滤膜两遍，进行整粒，再于油镜下观察脂质体的形态，画出所见脂质体结构，记录最多和最大的脂质体粒径。【注意事项】(1)在整个实验过程中禁止用火。(2)磷脂和胆固醇的乙醇溶液应澄清，不能在水浴中放置过长时间。磷脂和胆固醇的比例可以采用4：1或5：1或6：1，如果磷脂和胆

7、固醇的质量不好，建议采用6：1。(3)磷脂、胆固醇形成的薄膜应尽量薄。(4)60-65℃水浴中搅拌水化10-20min时，一定要充分保证所有脂质水化，不得存在脂质块。2．盐酸小檗碱脂质体的制备（被动载药法）【处方】注射用豆磷脂0.6g胆固醇0.2g无水乙醇2-20m1盐酸小檗碱溶液(1mg／m1)30ml制成30ml脂质体【制备】被动载药法(1)盐酸小檗碱溶液的配制称取适量的盐酸小檗碱溶液，用磷酸盐缓冲液配成lmg／ml和3mg／m1两种浓度的溶液。(2)盐酸小檗碱脂质体的制备按处方量称取豆磷脂、胆固醇置于1

8、00ml烧瓶中，加无水乙醇，余下操作除将PBS换成盐酸小檗碱溶液外，同“空白脂质体制备”，即得“被动载药法”制备的小檗碱脂质体。【质量检查】观察粒子形态，最大粒径与最多粒径，药物的包封率。【注意事项】同前。3．盐酸小檗碱脂质体的制备（主动载药法）【空白脂质体处方】注射用豆磷脂0.9g胆固醇0.3g无水乙醇2-20m1柠檬酸缓冲液30ml制成约30ml脂质体【制备】主动载药法（1）空白脂质体制备称取磷