最新课题3-血红蛋白的提取与分离教学讲义PPT课件.ppt

《最新课题3-血红蛋白的提取与分离教学讲义PPT课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、课题3-血红蛋白的提取与分离宜宾县二中生物备课组课题3血红蛋白的提取和分离课题背景蛋白质是生命活动不可缺少的物质。随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因组测序工作的完成，人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质的研究与应用，首先需要获得纯度较高的蛋白质。因此，从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是生物科学研究中经常要做的工作。血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分负责血液中O2和CO2的运偷。在本课题中，我们将以血红蛋白为实验材抖，学习蛋白质提取和分离的一些基本才技术知识回顾--------有关蛋白质的几个问题：1、含量2、组成元素3、相对分子质

2、量4、基本组成单位：结构简式：种类：5、氨基酸连接方式占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物C、H、O、N高分子化合物氨基酸RHCCOOHNH2脱水缩合根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。问：依据什么来分离和提取蛋白质（原理P65图5－13）基础知识阅读并回答　　　　　　　　（P64）1、凝胶色谱法另一个名称；2、凝胶色谱法分离蛋白质的依据；3、凝胶的实质；4、凝胶色谱法的原理；5、凝胶色谱法的具体过程。基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法的别名：分配色谱法是

3、根据相对分予质量的大小分离蛋白质的有效方法。4、凝胶①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的通道；②化学本质：多糖类化合物：③实例：葡聚糖、琼脂糖：2、凝胶色谱法的概念：根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。基础知识（一）凝胶色谱法3、依据的特性蛋白质分子量的大小。5、具体过程原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，（）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（），移动速度（），而（）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（）移动，路程（），移动速度（），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子

4、质量较大凝胶外部较短较快基础知识（一）凝胶色谱法基础知识（一）凝胶色谱法5、具体过程基础知识（一）凝胶色谱法5、具体过程在小球体内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。1、我们在什么地方遇到过缓冲物质的？2、缓冲物质有哪些？3、缓冲溶液的作用是什么？4、怎样配制缓冲溶液？基础知识（二）缓冲溶液1、缓冲溶液概念在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、

5、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。能够抵制外界的酸或碱的对溶液的PH值的影响，维持PH基本不变。2、缓冲溶液作用基础知识（二）缓冲溶液3、缓冲溶液配制通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。①弱酸和弱酸盐组合H2CO3/NaHCO3CH3COOH/CH3COONa4、缓冲溶液的组分分类基础知识（二）缓冲溶液②弱碱和弱碱盐③多元弱酸的酸式盐和其他所对应的次级盐NH4OH/NH4CINaH2PO4/Na2HPO4KH2PO4/K2HPO4思考：你认为在血红

6、蛋白的提取和分离整个实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科学研究(活性)。基础知识（二）缓冲溶液生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程，就必须保持体外的pH与体内的基本一致。因此，缓冲溶液的正确配制和pH的准确测定，在生物化学的研究工作中有着极其重要的意义。问：在生物化学的研究工作，为什么要正确配制缓冲溶液和准确测定缓冲溶液的pH？阅读第65页的相关内容，回答以下问题：1、电泳的概念；2、电泳的原理

7、；3、电泳的种类；4、SDS的作用。基础知识（三）电泳1、概念带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2、原理①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。基础知识（三）电泳②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。3、电泳的类型琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。基础知识（三）电泳原理：许多重要的生物大分子，如（）等都具有()在()下，这些基团