最新细胞化学染色ppt课件.ppt

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1、细胞化学染色一、过氧化物酶(PeroxidaseStain，POX)染色【目的和原理】细胞内的过氧化物酶能将底物的过氧化氢分解，产生新生态氧。后者将试剂中的联苯胺氧化为联苯胺蓝，后者与亚硝基铁氰化钠结合，进而形成棕色化合物沉淀于酶的所在部位。【器材和试剂】1．第一液联苯胺0．3g360g／L亚硝基铁氰化钠饱和液lml95％L醇加至lOOml贮存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分装备用。2．第二液(稀过氧化氢液，新鲜配制)3％过氧化氢0．3ml蒸馏水　　25ml3．单核细胞系统：除早期原始阶段外皆呈弱阳性反应。其颗粒细小，弥散分布

2、，可覆盖核上，有的也可呈阴性反应。4．正常网状细胞(分化型)及吞噬细胞：可呈不同程度阳性反应。5．淋巴细胞、浆细胞、红细胞、巨核细胞系统等：均为阴性。6．Auer小体：呈阳性。【临床意义】POX染色是鉴别急性粒细胞白血病(简称急粒)、急性单核细胞白血病(简称急单)、急性淋巴细胞白血病(简称急淋)类型的重要细胞化学方法。1．急性粒细胞白血病：细胞分化较好时，原始粒细胞呈阳性反应，阳性率可>30%，在分化较差的白血病，如AML-M0和未分化型（AML-M1）的部分病例，原粒细胞的POX染色也可呈阴性。2．急性早幼粒细胞白血病时白

3、血病细胞呈强阳性反应。3．急性淋巴细胞呈阴性反应，FAB分型规定POX阳性率<3％。4．急性粒单细胞白血病：原始细胞POX染色多呈阳性，阳性率一般>20%，但难于区分原粒和原单时可进一步作酯酶染色鉴别。5、急性单核细胞白血病：原单和幼单POX多呈弱阳性或阴性，单核细胞呈弱阳性，阳性率常>3%，阳性颗粒较为细小、稀疏。6、中性粒细胞髓过氧化酶缺陷症：中性粒细胞POX染色，纯合子呈阴性，杂合子多为弱阳性。在一些髓系细胞白血病，如部分慢性髓细胞白血病（CML）患者，中性粒细胞POX染色可呈阴性或弱阳性，提示POX获得性缺陷。【注意

4、事项】1．过氧化氢必须新鲜配制。过氧化氢的最适浓度是0．05mol／L左右，浓度过高，反而抑制酶作用。一般采用5ml蒸馏水，加3％过氧化氢一滴。若用30％的过氧化氢时，只能在100ml蒸馏水中加1～2滴。涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即示过氧化氢过浓。若过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示无效。2.染色时稀释过氧化氢之后必须与联苯胺液充分混合，否则同一涂片细胞染色情况不一致。【评价】POX染色是鉴别急性白血病类型最常用的细胞化学染色方法。但若原始细胞均呈阴性（阳性率<3％），并不能肯定是急性淋巴细胞白血病，因

5、为分化较差的白血病性原粒细胞、原单细胞、原巨核细胞、原淋巴细胞均可呈阴性，此时应结合其他细胞化学染色、细胞免疫表型分析等进行鉴别。二、铁染色(IronStain)【目的和原理】骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，其中的三价铁与分子中的蛋白质结合不牢，经稀盐酸处理后而游离，并能在酸性亚铁氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞内铁也可用此法显示。【材料】1.酸性亚铁氰化钾溶液取200g／L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓缓滴加浓盐酸，边滴边摇匀，至出现白色沉淀，再滴加200g／L亚铁氰化钾溶液，亦边滴边摇匀，至白色沉淀消失为止，备用。2．

6、2g／L核固红-硫酸铝溶液取硫酸铝2g溶于100ml蒸馏水中，再加入核固红(Emerk出品)0.2g。置37℃水浴中1h并随时振荡，使溶解，过滤后使用。【步骤和方法】1.选骨髓小粒丰富的骨髓片，用甲醇固定10min，待干。2．玻片上滴满酸性亚铁氰化钾，染色30min(可置37℃环境)3.用蒸馏水冲洗后用核固红染液复染10—15min。4．流水冲洗、待干、镜检。【结果】(1)幼红细胞核呈鲜红色，浆呈淡黄红色，铁粒呈蓝绿色。(2)细胞外铁：用低倍镜观察涂片，特别是涂片尾部和髓粒附近，注意翠蓝色颗粒的存在，可分五级标准。(-)：无

7、颗粒(+)：有少数铁颗粒或偶见铁小珠(颗粒体积大于嗜酸性粒细胞的颗粒者称为铁珠)。(++)：有较多的铁颗粒和小珠。(+++)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。(++++)：有极多铁颗粒、小珠，有很多的小块，密集成堆。(3)细胞内铁：用油镜计数100个中、晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色铁粒的细胞(铁粒幼红细胞)的百分率。并根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况，将铁粒幼红细胞分为四型：I型：幼红细胞内含铁粒1--2粒；Ⅱ型：幼红细胞内含铁粒3-5粒；Ⅲ型：幼红细胞内含铁粒6—10粒；Ⅳ型：幼红细胞内含铁粒>10

8、粒。(4)环形铁粒幼红细胞的标准为含铁粒在6粒以上，其中2／3以上的铁粒围核成完全或不完全性环形(围核1／2以上的区域有铁粒环绕)。【临床意义】1．参考值细胞外铁+--++(2／3人为“+”，1／3人为“++”)。细胞内铁阳性率为19％--44％，平均21．4％，以I型为主，少数为Ⅱ型，所