狼毒及其饮片的质量标准研究.docx

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1、狼毒及其饮片的质量标准研究狼毒EuphorbiaeEbracteolataeRadix系大戟科植物月腺大戟EuphoriaebracteolataHayata或狼毒大戟E.fischerianaSteud.的干燥根,味辛性平,大毒,具有逐水祛痰、散结杀虫等功效。现代临床常用其治疗淋巴结结核、神经性皮炎、皮癣等疾病。瑞香科的瑞香狼毒StellerachamaejasmeL.与狼毒在别名、药用部位、性状和功效等方面都较为相似,因此,从明代以来便与狼毒混用严重。同时,在市场调查中发现,海芋Alocas

2、iamacrorrhiza(Linn.)Schott、鸡肠狼毒EuphorbiaesulaL.等植物的根也常被当做狼毒售卖。然而,2010版《中国药典》一部狼毒项下仅规定了性状、水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇浸出物等检查项,缺少专属性TLC鉴别和含量测定项,而且狼毒饮片项下仅有其炮制方法,未对其质量标准做任何规定。鉴于如此混乱的药材市场情况和质量标准的不足,本课题对狼毒及其饮片进行了系统的质量标准研究,并起草了狼毒及其饮片的质量标准草案。研究发现,月腺大戟和狼毒大戟均含有大量的萜类、苯乙酮类、鞣质、甾醇类

3、成分,其中二萜类化合物岩大戟内酯B(JolkinolideB)含量较高,且具有较强的杀虫及抗肿瘤活性,与狼毒药材的药理活性相一致。并且易混淆品瑞香狼毒等药材中,并无文献报道含有岩大戟内酯B。从结构特征性、活性,以及含量方面,岩大戟内酯B均符合对照品的要求,能真实客观的评价狼毒的真伪与品质,因而可作为狼毒专属性鉴别以及含量测定的指标成分。通过柱色谱、半制备色谱等方法,分离得到岩大戟内酯B,通过紫外光谱、质谱、氢谱、碳谱和旋光鉴定了其结构；通过HPLC-UV的方法检测其纯度大于98%,可以作为定性定量用标准品。同时以岩

4、大戟内酯B和对照药材为对照建立了狼毒专属性TLC鉴别方法,以环己烷：乙酸乙酯=8.5：1.5为展开剂,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点清晰后,于365nm紫外灯下检视。结果发现,21批狼毒样品中与对照药材(月腺大戟或狼毒大戟)以及对照品在相应的位置,显相同颜色的斑点,伪品瑞香狼毒及同科属植物京大戟则未见对照斑点,表明此方法专属性较强。建立了HPLC测定狼毒药材中岩大戟内酯B含量的方法。用乙醇提取狼毒药材,色谱条件为：色谱柱Agilent(5μm,250×4.6mm);流动相：乙腈：水(65：35)；柱温

5、：30℃；检测波长：238nm。方法线性范围：2.125μg/ml～27.2μg/ml;平均加样回收率：102.60%,RSD值为1.10%,根据21批药材的测定结果(0.00910%～0.04168%)拟定,以干燥品计算,狼毒中岩大戟内酯B的含量不得少于0.012%。建立了较为完善的醋狼毒饮片质量标准。前述狼毒药材的TLC鉴别和HPLC含量测定条件同样适用于饮片,研究发现狼毒炮制前后的TLC特征无明显差异,但炮制后岩大戟内酯B的含量普遍降低(0.01077%～0.02549%)。根据15批醋狼毒的测定结果拟定,以

6、干燥品计,醋狼毒中岩大戟内酯B的含量不得少于0.01%,水分不得超过13%,总灰分不得超过7.0%,酸不溶性灰分不得超过1.0%,浸出物不得低于20.0%。同时,对10批月腺大戟、10批月腺大戟来源的醋狼毒及2批狼毒大戟进行了UPLC旨纹图谱分析。以岩大戟内酯B为内参照物,采用WatersC18(1.8μm,100mmL×2.lmmID)色谱柱,乙腈-水梯度洗脱,柱温：30℃,流速：0.4ml·min-1,于210nm、238nm和280nm三个波长下进行检查。结果发现：1)10批月腺大戟药材在此三个波长下分别确认

7、了12、7和7个共有峰,而且21Onm下的相似度较238nm和280nm下较低,且分布不均匀,可能是由于共有峰较多的缘故：210nm下仅有9批相似度达到0.9以上,范围为0.876～0.983,238nm下相似度范围为0.946～0.990,280nm下相似度范围为0.914～0.994；2)月腺大戟来源的10批醋狼毒在三个波长下分别确认了11、6和6个共有峰,在不同检测波长下相似度分布均比较均匀,都达到0.9以上；3)月腺大戟来源的狼毒饮片与药材对比,发现在三个波长下,饮片与药材相同的主要共有峰面积均有所下降；4

8、)通过狼毒大戟与月腺大戟指纹图谱对比,发现狼毒大戟与月腺大戟在三个波长下的相似度都较低,均低于0.9,且在不同检测波长下,峰数量和共有峰的面积均有较为明显地区别,证明二者在化学成分方面相差较大。