T∕CALAS 37-2017 实验动物 SPF鸭遗传学质量监测.docx

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1、ICS64.020.30B44中国实验动物学会团体标准T/CALAS37—2017实验动物SPF鸭遗传学质量监测Laboratoryanimal-Populationgeneticssurveillanceofspecificpathogen-freeducks2018-01-01实施2017-12-29发布中国实验动物学会发布本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则编写。本标准参考世界粮农组织推荐的鸭多态性微卫星DNA标记位点，确定了无特定病原体(SPF)鸭的群体遗传学质量监测方法。本标准由

2、中国实验动物学会归口。本标准由全国实验动物标准化技术委员会(SAC/TC281)技术审査。本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。本团体标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国食品药品检定研究院、北京实验动物研究中心。本标准主要起草人：韩凌霞、陈洪岩、岳秉飞、卢胜明。实验动物SPF鸭遗传学质量监测1范围本标准规定了无特定病原体（SPF）鸭的遗传学质量监测方法。本标准适用于封闭群鸭和MHC单倍型鸭的遗传学质量控制。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1SPF

3、鸭specificpathogen-freeduck无特定病原体鸭是指人工繁育，对其携带的病原微生物及寄生虫进行控制，遗传背景明确或来源清楚，用于科学研究、教学、生产、检测、检定及其他科学实验的实验鸭。2.2单倍型haplotype单倍型是单倍体基因型的简称，遗传学上是指在同一条染色体上进行共同遗传的多个基因座上等位基因的组合，即若干个决定同一性状的紧密连锁基因构成的基因型。2.3主要组织相容性复合体majorhistocompatibilitycomplex,MHCMHC是一组紧密连锁高度多态的

4、染色体基因群，编码主要组织相容性抗原，其编码产物与免疫识别、排斥和免疫应答有关，在一定程度上决定动物个体对疫病的易感性或抗性。2.4基因频率genotypefrequency基因频率是指一个种群基因库中某个基因占全部等位基因数的比率。2.5封闭群closedcolony以非近亲交配方式进行繁殖生产的SPF鸭种群，在不从其外部引人新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上，群体的基因频率达到稳定，每代近交系数增加量不超过1%。3繁殖方法3.1封闭群3.1.1种鸭必须遗传背景明确或来源清楚，有较完整的资料（

5、包括来源、品系名称、日期及主要生物学特征等）。94•’第二篇实验动物质量控制系列标准3.1.2繁殖原则为尽量保持基因异质性及多态性，避免近交系数随繁殖代数增加而过快上升。3.1.3各家系之间采用最佳避免近交法、循环交配或随机交配法，每代近交系数上升不超过1%。3.2MHC单倍型鸭3.2.1鸭群的MHC核心区域保持单倍型纯合。3.2.2以全同胞或半同胞兄妹交配方式进行繁殖。3.2.3雌雄个体比例一般为1：8~1：10。4遗传质量监测4.1封闭群的遗传质量检测4.1.1抽样比例全群检测。4.1.2检测

6、方法采用微卫星分子标记检测方法。具体方法执行附录A。4.1.3检测频率每个世代进行1次遗传质量检测。4.1.4结果判定根据基因频率评价，基因频率保持稳定，判为合格。4.2MHC单倍型鸭的监测4.2.1抽样比例全群检测。4.2.2检测方法检测MHC区域核心基因的高变区分型。具体方法见附录B。4.2.3检测频率每个世代至少进行1次遗传质量检测。4.2.4结果判断分型结果与标准序列完全一致，判为合格。实验动物SPF鸭遗传学质最监测95附录A（规范性附录）封闭群SPF鸭的微卫星DNA标记检测方法A.1基因

7、组DNA提取翅静脉采集拧檬酸钠抗凝血。常规酚-氯仿抽提法提取基因组DNA。A.2PCR反应程序（附表A.1）附表A.1封闭群SPF鸭PCR反应程序组分用量/gL终浓度10xTaqBuffer1.51.5mmdNTP1.52.5mmol/LeachPrimerMix0.2510pmol/gLTaqPolymerase0.32.5U/pLDNATemplate1.5100ng/

8、iLddH2O10总体积1595丈、5min；94%；、30s,50-64%：,30s,72丈、30s,30-35个循环；7

9、2弋、10min；4%：保存。A.3PCR产物检测取5piLPCR产物与16xLoadingBuffer上样缓冲液混匀，根据其产物片段的大小分别用2%〜2.5%的琼脂糖凝胶，电泳检测，于紫外灯下观察结果并拍照，然后再利用ABI3130XLDNA测序仪进行分析。上样前用灭菌去离子水将PCR的扩增产物根据检测结果稀释适宜倍数后，取稀释产物2nL和含分子质量标准的上样缓冲液8nL混合，95弋变性5min,取出后立即置于冰上。5min后，将变性的PCR产物上样，在ABI3130DNA测序仪