GBT 8381.2-2005 饲料中志贺氏菌的检测方法

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1、ICS65.120B46遏日中华人民共和国国家标准GB/T8381.2-2005饲料中志贺氏菌的检测方法DeterminationofShigellainfeed2005-09-05发布2006-02-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会GB/T8381.2-2005月U舌本标准参照采用GB/T4789.5《食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验》的有关内容。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心

2、(北京)本标准主要起草人:饶正华、李丽蓓、杨曙明、苏晓鸥。GB/T8381.2-2005饲料中志贺氏菌的检测方法范围本标准规定了饲料中志贺氏菌的检测方法。本标准适用于饲料中志贺氏菌的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T14699.1饲料采样3设备和材料3.1天平:感量1g，最大称量1000g,3.2均质器

3、或乳钵。3.3恒温培养箱。3.4显微镜。3.5灭菌广口瓶:500mL3.6灭菌三角烧瓶:500mL,250mI。3.7灭菌平皿:皿底直径90mme3.8载玻片。3.9酒精灯。3.10灭菌金属匙或玻璃棒。3.11接种棒，镍铬丝。3.12试管架3.13硝酸纤维素滤膜:150mmX50mm,00.45lim。临用时切成两张，每张70mmX50mm，用铅笔划格，每格6mmX6mm。每行10格，分6行。灭菌备用。4培养基和试荆除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水(或去离子水，或相当纯度的水)。4.1GN增菌液:见附录B的B.1章。4.2HE

4、琼脂:见附录B的B.2章。4.3SS琼脂:见附录B的B.3章。4.4麦康凯琼脂:见附录B的B.4章。4.5伊红美蓝琼脂(EMB):见附录B的B.5章。4.6三糖铁琼脂(TSD:见附录B的B.6章4.7葡萄糖半固体管:见附录B的B.7章。4.8半固体管:见附录B的B.8章。4.9葡萄糖按琼脂:见附录B的B.9章。4.10尿素琼脂(pH7.2):见附录B的B.10章。GB/T8381.2-20054.11西蒙氏柠檬酸盐琼脂:见附录B的B.11章4.12氰化钾(KCN)培养基:见附录B的B.12章。4.13氨基酸脱狡酶试验培养基:赖氨酸、鸟氨酸及对照培养

5、基，见附录B的B.13章。4.14糖发酵管:棉子糖、甘露醇、甘油、七叶昔及水杨昔，见附录B的B.14章4.155%乳糖发酵管:见附录B的B.15章。4.16蛋白陈水、靛基质试剂:见附录B的B.16章。4.17志贺氏菌属诊断血清5试样的制备进行微生物检验的饲料的采样和试样制备按G川T14699.1规定执行。实验室样品真实、具有代表性在运输和贮存过程中没有发生损失或改变。5.1采样应在无菌操作下进行。5.2采样工具，如探子、铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子等，必须是灭菌的。5.3根据样品种类如袋、瓶和罐装者，就取完整的未开封的。如果样品很大，则需用

6、无菌采样器取样;样品是固体粉末，应边取边混和;是流体的，通过振摇混匀;样品送到微生物检验室越快越好，一般应不超过3h。如果路途遥远，可将试样于。0C^-5℃保存(如冰壶)。6操作步骤(见附录A)6.1增菌称取饲料试料25g，加人装有225mLGN培养菌液(B.1)的500mL广口瓶(3.5)内，于360C培养6h-v8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应终止培养。6.2分离和初步生化试验6.2.1取增菌液I环，划线接种于HE琼脂(B.2)平板或SS琼脂(B.3)平板1个;另取1环划线接种于麦康凯琼脂(B.4)平板或伊红美蓝琼脂

7、(B.5)平板1个，于36℃培养18h--24h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。6.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂(B.6)和葡萄糖半固体(B.7)各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18h-24h，分别观察结果6.2.3出现下述现象的培养物可以视为阴性:a)在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物;b)在18h-24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物;。)不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物;d)产气的培养物;e)有动力的培养物;f)产生硫化氢的培养物6.2.4凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志

8、贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验6.3血清学分型和进一步的生化试验6.3.1血清