植物组培污染ppt课件.pptx

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1、植物组培过程中的污染及预防措施PPT制作：李郑慧、杨文娇PPT演示：劳梦组培过程中的污染一、实验器皿和无菌操作室二、实验人员的污染三、培养基的污染四、外植体的污染五、接种过程中的污染六、继代培养产生的污染一、实验器皿和无菌操作室接种室和培养室：1.人员的进出导致接种室和培养室空气中存在大量细菌和真菌，尤其是接种过程中非工作人员的进出；2.接种室设计不合理，造成室内灰尘、细菌过多；3.超净工作台置于灰尘太多的地方，过滤装置使用过久、保养不当造成失效；4.组培室、接种室门窗封闭不严，苍蝇等趁机飞入，利于杂菌传播；5.培养室面积大易污染，室内温度高、空气湿度大，菌类繁殖旺盛也

2、会加重污染。二、实验人员的污染.1.过长指甲；双手未清洗干净；衣服和头发有很多灰尘，接种时不换拖鞋、接种服、帽子和口罩2.不慎将已污染的培养材料拿入超净工作台，转接后再次污染3.超净工作台上物品摆放过多、过高使气流被挡住，导致灭菌效果差4.接种时说话或咳嗽会呼出大量细菌；5.操作时手超出工作台面；6.手接触培养容器边缘，放在器皿、接种器械上方致使微生物落入培养容器中；二、实验人员的污染7.打开培养容器的塞子、盖或封口膜时空气进入带来灰尘；8.接种过程中器械被手或带菌材料污染后未经消毒，再次使用后又污染了材料；9.没有在超净工作台下风方向操作而使菌类随风飘落到容器中；10.

3、中途离开超净工作台后马上又继续接种，将培养基、器械等物品拿入超净工作台继续接种而带入灰尘，顺风飘入器皿；11.服装、帽子、口罩、拖鞋长期穿戴后较脏，表面有大量灰尘，未经清洗反复穿戴后造成污染。防治措施在进入实验室内，必须穿指定拖鞋；员工进入实验室时，将自己的鞋放入鞋柜，换上指定实验室拖鞋方可进入实验室内上岗。员工上班不能着艳装，不能穿挂带式衣服，不能穿短裤、裙子上班，上班不能裸脚。全体员工在进入实验室前应自觉做好自检是否携带禁品（如：与无作无关的东西或食品 等），并按规范穿好防静电衣、裤、鞋、帽后方可进入生产实验室内。每天上班操作前必须确认有按作业指导书要求或本规范做好防

4、尘措施，有戴手套或指套。 检查周期：每天2次上午下午各1次。除操作员外，相关人员要进实验室必须经过主管审批后，方可进入实验室；三、培养基的污染1.在培养基配置的过程中，会加入糖、水、无机盐、维生素、植物生长调节物质等物质。使用长菌的母液配制培养基；2.培养基pH值高、添加的有机成分均可导致细菌污染；3.培养基分装好后没有及时封口或封口后没有立即灭菌；4.培养容器口没有封严导致灭菌后细菌和真菌孢子再次进入培养容器使培养基污染；5.封口用的塑料盖、封口膜长时间在日光灯照射下易老化、破裂，导致密封性差，不慎使用后可能导致培养基污染；三、培养基的污染6.橡皮筋长时间在日光灯照射下

5、也易松动、断裂，杂菌可能趁机进入培养容器；7.灭菌方法不当导致培养基污染；8.灭菌时间过短导致培养基灭菌不彻底；9.灭菌时间达到后立即打开灭菌锅，导致容器内压力差过大，使外部杂菌有可能被倒吸入容器中；10.过滤较多溶液后，滤膜过滤效果较差，使过滤后的溶液有菌，加入培养基后造成污染。防治措施分装后的培养基封口后应尽快进行高温高压灭菌。灭菌不及时，会造成杂菌大量繁殖，使培养基失去效用。为了保证培养基灭菌彻底，降低污染，在灭菌过程中需注意以下几个环节：（1）灭菌加热过程中应使灭菌锅内的冷空气放尽，以保证灭菌彻底；（2）锅内灭菌物不能堆放过满，否则，将阻碍蒸汽的流通和热交换，使容

6、器内升温减慢，造成物体内部杀菌不完全；（3）灭菌后，应切断电源，使灭菌锅内的压力缓慢降下来，接近“0”时，才可打开放气阀，排出剩余蒸汽后，打开锅盖取出培养基。注意：千万别急于取出培养基而打开放气阀，这样会造成降压过快，使容器内外压差过大，液体溢出，造成浪费、污染，甚至危机人身安全。四、外植体的污染①年龄、种类和大小。成年植株带菌多；生理年龄老的材料带菌多；杂菌和内生菌多的外植体、有病虫害的植株，均易污染；室外生长的材料带菌多；表面有泥土的材料、地下器官均带菌多；表面积大的材料比表面积小的材料带菌多。②取材时期和部位。雨季菌类繁殖旺盛，此时材料带菌多；阳光最强时紫外线较强，

7、杀菌效果好，此时材料带菌较少；选取了不清洁、生长不旺盛部位的材料带菌多。四、外植体的污染③灭菌效果。外植体灭菌是组织培养的关键，灭菌效果直接决定了组织培养的成败，灭菌方法和灭菌剂处理不当导致灭菌效果差，使外植体带菌。如消毒剂消毒效果不够，或者灭菌时间太短，使得微生物没有被完全杀死。另外消毒步骤不正确，不能达到最佳的灭菌效果，也可能导致细菌或真菌残留。防治措施1.外植体的采集2.材料的表面消毒1.外植体的采集为了防止材料带菌，我们在采集外植体时，应注意以下几点：在生长健壮的无病虫害的植株上选取发育正常的组织或器官；或将嫩梢采集回