液相色谱基础知识(waters)资料.ppt

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1、液相色谱基础知识(waters)对HPLC柱填料的了解（二）平均孔径/孔体积孔径/孔体积分布大的孔径可分析高分子量的分子对HPLC柱填料的了解（三）键合相化学影响化合物的分离度：a不同键合相对不同种类的化合物分离不同可能导致色谱的分离机理不同如：C18、C8、CN硅胶表面及键合相键合相色谱柱以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺基等基团联在基质上，作为固定相。优点∶固定相稳定，不易流失应用广泛，可使用多种溶剂消除硅羟基的不良影响缺点∶pH值不能小于3同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同对HPLC柱填料的了解（四）含碳量

2、含碳量越高，k'值越大（固定相传质效应增加）高含碳量有利于不易保留的化合物的分离水解稳定性好，重现性好有利于极性化合物的拖尾改善低含碳量有利于分析中性及碱性化合物降低溶剂损耗不同色谱柱的含碳量色谱柱C%k'苊(50/50的乙腈/水)SymmetryC181917ZorbaxODS1715.7LiChrosorbRP-181510.3SymmetryC81212.5ResolveC-181212.4UltrasphereODS1111.3PartisilODS-31112.0mBondpakC-18107.9Nova-PakC

3、-1875.5对HPLC柱填料的了解(五)填料的端基封口封口残余硅羟基减少不可逆吸附或拖尾增加碳含量（0.1%-1%）残基处理的效果NovaPakC18未封口C18①抗坏血酸②烟酰胺③对氨基苯甲酸④哌咯西叮⑤核黄素⑥苯酚⑦盐酸硫胺对HPLC柱填料的了解（六）硅胶的活性主要影响碱性化合物的保留行为：k'生产硅胶时处理温度不同，硅胶活性也不同是选择性差异的主要来源硅胶的杂质含量重金属含量低，硅羟基活性小，拖尾减小是色谱柱质量好坏的重要标志对HPLC柱填料的了解（七）填料的稳定性硅胶填料pH：2-8聚合物填料pH：2-12pH值小

4、于2时键合相水解填料基质物理性质的影响所有C18柱都是相同的吗?填料基质的物理性质对色谱柱的影响平均孔径及其分布∶影响被分析样品的分子量，大孔径的可分析高分子量样品平均孔体积及其分布∶影响同孔径含碳量∶影响化合物的保留时间，高含碳量保留时间长填料的端基封口∶主要影响碱性化合物的峰形，未封口会使碱性化合物拖尾硅胶的活性∶主要影响碱性化合物的保留行为：K’，高活性的K’大硅胶的杂质含量∶更苛刻条件下的碱性化合物峰形Waters色谱柱的内径分析柱：WatersSpherisorb及其它公司品牌的色谱柱多为4.6mm内径。Wate

5、rs传统品牌的分析柱以3.9mm内径为主，比一般分析柱(4.6mm)细，因此：相对灵敏度高省溶剂，可用相对较低的流速同样的流速下，柱压较高(高效柱尤为明显)注意在用文献方法时转换流速,即:降低流速,以保持线速度相同。色谱柱化学及外形结构的关系对HPLC柱的了解理论塔板数(N),容量因子(K’),选择性系数(),其影响因素有∶N：受平均颗粒度及颗粒度分布的影响,颗粒度越小,N越高：受填料表面化学性质对色谱柱的影响,不同键合相对不同种类样品分离不同K’：受键合相表面含碳量的影响,含碳量高时保留时间长在同样情况下保留行为也有差

6、异因此：需要对色谱化学品(色谱柱)有更多的了解需要不同品牌，即各个因素有较大差异的色谱柱，以得到更多种选择性Waters拥有众多不同品牌的色谱柱，目的就是：供不同应用的要求用不同品牌的色谱柱时，色谱方法有时可能需要重新开发Waters各种硅胶基质的色谱柱Waters不同品牌的色谱柱m-BondaPak文献背景强,是工业标准平均孔径125Å，10mm高活性、无定形硅胶中等疏水性表面，端基封口。有独特选择性Nova-Pak平均孔径60Å，4mm高韧度低活性球形硅胶低酸性，高疏水性,极好的端基封口有利于小分子物质的分析Waters

7、不同品牌的色谱柱Resolve平均孔径90Å，5/10mm低活性硅胶非常高的疏水性,无端基封口有利于低保留的中性及酸性化合物分离Delta-Pak有100Å和300Å两种孔径，5/15mm硅胶中到高的疏水性，端基封口适合于多肽、蛋白的分离及制备色谱新一代硅胶基质的色谱柱Symmetry高纯度硅胶：Fe,Al,Mg等均<10ppm孔径100Å，5m球形颗粒，端基封口超高含碳量：C18/19%，C8/12%表面积：300m2/g孔体积：1mL/g特点对称峰形，好重现性，不同的选择性，使用寿命长由于拖尾引起的灵敏度差异他莫昔芬0.

8、25g/mL信噪比11.06.5AUSymmetryC18AU5.0010.00MinutesConventionalC1899.6%99.8%99.9%峰面积回收率T=1.0092.3%95.3%97.8%T=1.58Waters21,379峰面积回收率由于拖尾引起的积分误差超越极限：