waters色谱讲座-液相色谱柱基础知识

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1、中国有限公司培训中心Waters)(四液相色谱教程液相色谱柱基础知识中国有限公司培训中心Waters知识(1)液相色谱柱基础色谱柱及其填料径,长(内尺寸)和…高效液相色谱柱简介不尽相同硅胶基质聚合物基质色谱柱是一根填满填料的管子柱管的材料(塑料,玻璃,不锈钢短)管内的填料更是种类繁多,主要分为两大类––色谱柱的性能主要取决于填料的性质和填充技术°°°°©2004WatersCorporation氢氧硅i)S硅原子与氧原子彼此结合O––硅胶的结构－(Si=”硅氧键“无定形的多孔基质形成°©2004WatersCorporati

2、onnelasithoxye(TEOS)Tetra1.合成硅胶基质2.键合配体(键合相)3.端基封口合成步骤：–––neilas)°yxoth(PEOSlyeoP液相色谱填料的合成(1)传统硅胶颗粒基质°©2004WatersCorporation表面硅醇基和微孔注意:未键合的硅胶颗粒:孔表面©2004WatersCorporation：残留硅羟基8C1硅胶基质键合相(配体)团液相色谱填料的合成（2）端基封口基合成步骤：1.合成硅胶基质2.键合配体(键合相)3.端基封口°©2004WatersCorporation，之后研磨

3、成小颗粒))))硅胶(不同硅胶的制作过程球形颗粒球形颗粒无定形颗粒(:(:(®yrt过程e过程ml”1mova-Pak®yBondapak™Nµ-硅酸钠聚合成硅酸-胶态硅球被熔融入色谱颗粒中-S纯硅烷聚合形成色谱颗粒硅酸钠沉淀：“SolGe“SilGel”1°°°©2004WatersCorporation)Corasil)及y--etr/gm2<50m(WatersµBondapak™)m专用）10µmC表面积很低(杂化填料3-5µm(WatersSym)3.5µ,5µmUPL硅胶颗粒技术的沿革5µm(WatersSphe

4、risorb®（(1.7µWatersNova-Pak®)薄膜无孔填料无定形多孔填料球形填料纯球形填料机硅胶和有机硅胶杂化填料高无atersXterra小颗粒atersBEH年年W年W--六十年代七十年代八十年代199520002004°°°°°°©2004WatersCorporation柱压越高(渗透性差)对色谱柱填料的了解(一)谱带扩展颗粒度越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小)颗粒分布越宽:柱效低(渗透性差)球型:柱效高、重现性好、柱床结构均匀无定型：柱床结构不均匀,流动相线性速度不均匀°颗粒度°颗粒分布°颗粒形状°平

5、均颗粒度，颗粒度分布–––°©2004WatersCorporation硅胶颗粒的形状）(Irregular)Spherical大硅胶颗粒研磨，筛分颗粒尺寸和表面积限制目前流行的分析填料更好的性能，重现性不规则形状––球形（––°°©2004WatersCorporation对色谱柱填料的了解(二)、CN8、C18影响化合物的分离度：α不同键合相对不同种类的化合物分离不同可能导致色谱的分离机理不同如：C键合相化学––––°©2004WatersCorporation键合相色谱柱固定相稳定，不易流失应用广泛，可使用多种溶剂消除

6、硅羟基的不良影响pH值不能小于2(键合相水解)同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺基等基团联在基质上，作为固定相优点∶–––缺点∶––°°°©2004WatersCorporation)RP18…rpuShieldPolaGro过程而来内嵌极性基团配体步合成33CH由一CH传统直链烷基配体带有内嵌极性配体的色谱填料Si3(Si3CHCHOOWatersSymmetry°©2004WatersCorporation）%1-%0.1对色谱柱填料的了解(三)封口残余硅羟基减少不可逆吸附或

7、拖尾增加碳含量（填料的端基封口–––°©2004WatersCorporation酚抗坏血酸烟酰胺对氨基苯甲酸哌咯西叮核黄素盐酸硫胺①②③④⑤⑥苯⑦C18残基处理的效果未封口18CNovaPak©2004WatersCorporation值越大（固定相传质效应增加）k'对色谱柱填料的了解(四)含碳量越高，有利于不易保留的化合物的分离水解稳定性好，重现性好有利于极性化合物的拖尾改善有利于分析中性及碱性化合物降低溶剂损耗––––––含碳量高含碳量低含碳量°°°©2004WatersCorporation)/水/水的乙腈50.5(

8、50/77.95115.710.312.512.411.312.0'苊k975117C%11112121110不同色谱柱的含碳量-18PR8ODSC-18rbreC-18ODSODS-3sophe色谱柱axsBondpakSymmetryC18ZorbLiChroSymmetryC8Res