机能实验学：药物血浆半衰期的测定.ppt

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1、药物血浆浓度及半衰期测定实验目的以磺胺嘧啶钠为例学习测定药物半衰期（t1/2）等药动学参数的基本方法。8/30/20212实验原理磺胺类药物为对氨基苯磺酰胺类化合物，在酸性溶液中，可与亚硝酸钠起重氮反应，产生重氮盐。在碱性溶液中，重氮盐可与酚类化合物（麝香草酚）起偶氮反应，形成橙红色的偶氮化合物。可在525nm波长下进行比色测定。根据Beer-Lamber定律，浓度与光密度成正比关系。其化学反应式如下：8/30/20213橙红色实验动物健康家兔一只，雌雄不拘体重2~2.5kg8/30/20214实验器材：试管24只，移液吸管10ml，1只；

2、1ml，2只；2ml7只；移液器1支，吸头若干，试管夹，试管架，离心机，722型分光光度计，手术剪，眼科剪，止血钳，动脉夹，眼科镊，缝线，药棉，纱布，捆扎绳，注射器10ml1支，5ml1支。实验药品5%磺胺嘧啶钠溶液7.5%三氯醋酸溶液0.5%亚硝酸钠溶液0.5%麝香草酚溶液（溶于20％氢氧化钠内）草酸钾结晶25%氨基甲酸乙酯溶液肝素注射液1.取试管4只，依次用A1、A2、A3，A4标记，各加入草酸钾结晶几粒(抗凝)。2.取试管4只，依次用B1，B2，B3，B4标记，各加入7.5%三氯醋酸2ml备用。3.取家兔，称重，以25%氨基甲酸乙酯溶

3、液(乌拉坦)1g/kg(4ml/kg)耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将兔背位固定于手术台上，正中切开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，结扎其远心端，并在近心端夹上动脉夹，以阻断血流，再将放血导管向心脏方向插入颈总动脉内，用线打活结固定。4.耳缘静脉注入3%磺胺嘧啶钠4ml/kg，记录注完时间（准确到分钟）。5.给药后5min、10min、20min、30min，松开动脉夹，放血约1ml，分别置于A1、A2、A3、A4管，迅速摇匀抗凝，离心取上清。记录取血标本的准确时间。注意在取血前先要放掉动脉插管内的残血。8/30/20217方法与步骤8/30/202

4、18动脉取血约1ml，离心取上清准确移液100μl7.5%三氯醋酸2ml混匀1500转/分离心5min1.加0.5％亚硝酸钠0.5ml2.加0.5%麝香草酚1ml525nm测光密度BAC偶氮反应橙红色准确移上清液1.5ml颈总动脉放血A15min;A210min;A320min;A430min8/30/202196.然后准确吸取100μl加入相应的各B管,各管以1500转/分离心5min，分别取离心后的上清液1.5ml，加0.5%亚硝酸钠溶液0.5ml，摇匀，再加0.5%麝香草酚1ml，可见橙红色反应。以7.5%三氯醋酸2ml、0.5％亚硝

5、酸钠0.5ml、0.5%麝香草酚1ml的混合液作空白对照，用722型分光光度计于525nm波长下进行比色，测定各时间点的光密度，在标准曲线上查得磺胺钠浓度。C=583.78A-26.489根据吸光度,线性方程y=583.78x-26.489,计算浓度,求对数值.(Excel–常用函数–log10–计算对数值.)将给药时间t与已求得的磺胺药血浆浓度对数值做直线回归,根据一级消除动力学公式:Ct=Coe-Kt两边取对数：lgCt=lgCo+(-K/2.303)t回归方程的斜率(-K/2.303),计算K,t1/2=0.693/K给药后不同时间点

6、的磺胺钠浓度8/30/202111管号12345给药时间光密度值磺胺钠浓度磺胺钠对数浓度7.计算根据一级动力学消除公式t将给药时间t与已求得的磺胺血浆浓度对数值lgCt作直线回归，即可得回归方程的斜率（-K/2.303）和截距（lgCo）8/30/2021128/30/202113应用公式t1/2=0.693/K，Vd=D/Co，CL=K·Vd，便可求得t1/2、Vd和CL。1.计算器（Casiofx－180或fx－3600p）的操作步骤⑴MODE2屏幕显示LR，进入线性回归计算状态；⑵INVAC消除储存器内的全部数据；⑶XoDo自变量输入

7、；DATA因变量数据输入；⑷INVA（截距），INVB（斜率）INVr（相关系数）；⑸INVX得期望值。8/30/2021142.计算机的操作步骤（以Excel2002为例）将数据输入Excel中，调用其自带的函数，根据对话框要求操作即可完成运算。INTERCEPT（known-y’s，known-x’s）求线性回归拟合线方程的截距。CORREL（arrayl，array2）返回两组数值的相关系数。SLOPE（Known-y’sknown-x’s）返回经过给定数据点的线性回归拟合线方程的斜率。FORECAST（X，Known-y’sknow

8、n-x’s）通过一线性回归拟合线返回一个预测值。8/30/2021158/30/202120应用公式t1/2=0.693/K，【注意事项】麻醉药静脉推注速度不宜过快颈总动脉分离及