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时间:2020-09-05
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1、酚-氯仿法提取人外周血DNA第一天1、取600μLEDTA抗凝血于2ml离心管中,加1.4ml去离子水后颠倒混匀2、4℃,10000g离心10分钟,弃上清3、加2ml去离子水,充分洗涤并振荡至肉眼看不见大块沉淀4、4℃,10000g离心10分钟,弃上清5、加350μL消化液(蛋白酶K终浓度为1mg/ml),55℃水浴过夜消化第二天1,向消化好的溶液中加入等体积(350μL)的Tris-平衡酚,上下颠倒混匀3分钟2,4℃,12000g离心10分钟,用200μL粗口枪头小心吸取上清(约350μL)至新的2ml离心管3,加350μL酚
2、和350μL氯仿,上下颠倒混匀3分钟4,4℃,12000g离心10分钟,吸上清至新的2ml离心管5,重复步骤3一次6,4℃,12000g离心10分钟,吸上清至新的2ml离心管7,加40μL3M醋酸钠和1.5ml-20℃预冷的无水乙醇,轻柔上下颠倒混匀后可见白色絮状DNA沉淀析出8,4℃,12000g离心10分钟后弃上清,加1ml-20℃预冷的75%乙醇漂洗沉淀9,小心弃上清(不要倒掉沉淀)后瞬时离心,吸弃残留液体,室温晾干3-5min10,加100μL去离子水或1×TE溶解DNA,4℃保存,若长期不用则-20℃保存
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