实验动物学实验ppt课件.ppt

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1、实验三实验动物血液的采集及RBC测定一.实验目的和要求（1）学习和掌握实验动物血液采集的方法和技术；（2）通过本实验掌握血细胞计数板测定RBC的方法和技术。二.实验材料及用具兔、注射器、酒精棉球、血细胞计数板、盖玻片、胶头滴管、玻璃棒、显微镜、小试管、试管架、生理盐水、浓度为15g/L的乙二胺四乙酸溶液（EDTA）。三.实验内容（一）.采血方法实验动物的采血方法很多，按采血部位不同，可分为：尾部采血、耳部采血、眼部采血、心脏采血、大血管采血等。具体而言，主要包括剪尾采血、鼠尾刺血、眼眶静脉丛采血、断头采血、

2、心脏采血、颈静（动）脉采血等等。选择什么采血部位与使用何种采血方法，需视动物种类、检测目的、试验方法及所需血量而定。采血量采血部位动物种类少量尾静脉大鼠、小鼠耳缘静脉兔、犬、猫、猪、山羊、绵羊眼底静脉丛兔、大鼠、小鼠舌下静脉犬腹壁静脉青蛙、蟾蜍冠、脚蹼皮下静脉鸡、鸭、鹅中量后肢外侧批销小隐静脉犬、猴、猫前肢后侧皮下头静脉犬、猫、猴耳中央动脉兔颈静脉犬、猫、兔采血量采血部位动物种类中量心脏大鼠、小鼠、豚鼠断头大鼠、小鼠翼下静脉鸡、鸭、鸽、鹅颈动脉鸡、鸭、鸽、鹅大量股动脉犬、猴、猫、兔心脏犬、猴、猫、兔颈动脉、

3、颈静脉马、牛、山羊、绵羊摘眼球眶动脉和静脉大鼠、小鼠1.小鼠、大鼠采血法（1）尾静脉采血法：用血量不多时，可采用本法。A.剪尾或切开尾静脉动物固定后，露出尾巴，使尾部血管扩张，擦干，剪去尾尖（小鼠约1-2mm，大鼠5-10mm），血自尾尖流出，让血液滴入盛器或直接用吸管吸取。也可切开尾静脉一段，用试管等接住血液。该法可反复多次使用。B.针刺尾静脉固定动物，消毒，擦干。操作时，在尾尖部向上数厘米处用拇指和食指抓住，对准尾静脉用注射器刺入后立即拔出。采血后用压迫止血法进行止血。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端

4、穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。尾部采血（2）.心脏采血将动物仰卧固定在鼠板上，剪去胸前区部位的被毛，消毒。在左侧第3-4肋间，用左手食指摸到心搏处，右手持注射器选择心搏最强处穿刺。当针穿刺入心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器。心脏采血注意要点A.要迅速而直接插入心脏，否则心脏将从针尖移开。B.如果第一次没有刺准，将针头拔出重刺，但不要在心脏周围乱探，以免顺上心、肺。C.要缓慢而稳定地抽吸，否则太多的真空反而使心脏塌陷。如不需保留动物存活时，也可麻醉后切开动物胸膛，直接用注射器刺入心脏内采血，也可剪

5、破心脏直接用注射器或吸管吸血。（3）.摘眼球采血此法常用于鼠类大量采血。所采的血液微眶动脉和眶静脉的混合血。采血时，用左手抓住动物颈部皮肤，并将动物轻压在实验台上，稍微侧卧，左手拇指尽量将动物眼周围皮肤往眼后压，是动物眼球突出并充血，用弯头镊子迅速摘除眼球，眼眶内很快流出血液。该法可避免断头取血时因组织液混入所导致的溶血现象，且由于取血过程中动物未死，心脏还在跳动，因此取血量多于断头法。一般可取约为小鼠体重4-5%的血液量。但该方法易导致动物死亡，只能一次采血。（4）眶静脉丛（窦）采血小鼠为眶静脉窦，大鼠、

6、地鼠、沙鼠等位眶静脉丛。将动物麻醉，采用侧眼向上固定体位，用左手拇指和食指从背部较紧地握住大（小）鼠颈部。取血时，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，是头部静脉血液回流困难，眼球充分外突，眶静脉丛充血。右手持注射器或长颈硬质毛细玻璃管将采血管与鼠成45°角，在泪腺区域内，用采血管有眼内角在眼睑和眼球之间相喉头方向刺入，若为针头，其斜面先向眼球，刺入后再转180°角使斜面对着眼眶后界。由于血压的关系，血液即自动流入玻璃管中，得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时拔出采血量。刺入深度：小鼠约2-3mm，

7、大鼠约4-5mm，达到蝶骨后管道阻力，再稍后退0.1-0.5mm。2.兔的采血方法（1）.耳缘静脉采血将兔固定后选耳静脉清晰的耳朵，将耳静脉部位的毛拔去，用75%酒精局部消毒，待干。用手指轻轻摩擦兔耳，使静脉扩张，用注射器在耳缘静脉末端刺破血管待血液漏出取血或将针头逆血流方向刺入耳缘静脉取血，取血完毕用棉球压迫止血。此种采血法一次最多可采血5-10ml。(2).耳中央动脉采血经兔耳中央的一条较粗、颜色鲜红的动脉采血，可采到约10-15ml/次血。操作方法基本与静脉采血同。由动脉末端，朝向心方向进针，取血完毕

8、后注意止血。注意事项：不要在耳近根部进针，因其耳根部组织较厚，血管游离，位置较深，不清晰，易刺透血管造成皮下处血。兔胆小易惊，其外周血液循环对外界环境刺激极为敏感，耳中央动脉易发生痉挛性收缩，因此，抽血前必须让兔耳充血，并赶在动脉扩张，而未发生痉挛性收缩前立即抽血。（3）心脏采血方法同小鼠心脏采血。（二）红细胞（RBC）计数哺乳动物外周血液里的红细胞基本上没有细胞核，而禽类都有细胞核。为什么要测定红细胞的数量？一