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时间:2020-09-02
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1、ScienCell原代细胞培养方法2018.06.07原代细胞在复苏和传代前一定要包被培养瓶,以促进细胞贴壁。以人脐静脉内皮细胞(sciencell,货号#8000)为例:1.培养瓶包被包被液纤维粘连蛋白(sciencell,货号#8248)以1-2ug/cm2的浓度包被培养瓶。可将1mg/ml的纤维粘连蛋白不含钙镁离子的磷酸盐缓冲液(sciencell,货号#0303)稀释100倍,T-75培养瓶中加入10ml左右,37度孵箱1小时或4度冰箱过夜,并用灭菌双蒸水洗涤培养瓶2遍(此步骤非常重要,必须
2、清洗2遍),包被好的培养瓶不要放置超过24小时。2.配制培养基以ECM培养基为例把胎牛血清(sciencell,货号#0025)、生长因子(sciencell,货号#1052)和双抗(sciencell,货号#0503)加入培养液中,混匀后的完全培养基于4度保存,应尽快使用。可分装以延长效期。3.细胞复苏在培养瓶中加入配制好的ECM培养基10ml(推荐复苏至T75培养瓶,如T25瓶子加5ml)从液氮中取出冻存原代细胞,37度水浴冻融,冻融过程中可以轻轻转动细胞,加快冻融速度(注意原代细胞复苏时一定不
3、要离心),将融化的细胞放入已加入培养基的培养瓶中,再用1ml培养基洗涤细胞冻存管,保证原代细胞都被加入培养瓶中,然后静置于孵箱,12-16小时后更换培养基以除去DMSO。1.原代细胞传代细胞生长至70-80%左右可以传代,传代比例1:2或1:3为佳。首先弃去培养基,PBS或D-Hank’s液洗涤培养瓶2遍,加入适量0.25%Trypsin-EDTA,37度孵育,轻拍培养瓶侧面,显微镜下观察原代细胞消化情况。细胞消化好后,加入适量的胰酶中和液以中和胰酶,然后将原代细胞和培养基转移至离心管中,1000r
4、pm离心5分钟。然后弃去上清液,以1-2ml培养基重新悬浮原代细胞,加入包被好的已加入培养基的培养瓶中。根据原代细胞生长情况,大概每2天更换培养基。如果您在原代细胞培养过程中有任何问题,欢迎一起交流探讨。以上资料由北京裕恒丰科技有限公司提供
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