初始污染菌检验操作规程.doc

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1、初始污染菌检验操作规程1.目的测定样品细菌总数可用来判明样品细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对样品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，为下一步灭菌提供参考依据。2.适用范围适用于所有需要消毒灭菌前的产品、洁净车间3．作业条件：3.1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。3.2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。4．作业方法与步骤4．1制作营养琼脂培养基（参见《培养基制作作业指导书》），培养基需按要求培养16-18H后，

2、检查无菌生长方可使用。4．2无菌室洁净度验证4．2．1取3只培养皿在超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好置30～35℃培养48h后检查，3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个4．3产品采集与样品处理（制备供试液）4.3.1用无菌手续称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。作为1：10供试液。4.3.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45℃水浴中5～10

3、min，不时振摇。作为1：10的供试液。4.3.3采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。4.3.4供试液10倍递减稀释4.3.5待上述供试液自然沉降后取上清液1ml，加入9ml生理盐水，制备1：100的供试液。制备过程中尽量避免碎片等杂物的混入。4.4接种检验4.4.1取上述供试液上清液作初始污染菌数检测，取4个培养皿，每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注2个平皿。4.4.2经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。以顺时针或逆时针

4、方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。4.5培养将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。计算平板上的菌落数。4.6结果与判定4.6.1计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。4.6.2计数菌落层片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按下式计算结果平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次（或g）=———————————————————件次或重量（g）4.6.3菌落计数基本规则4.6.3.1、

5、选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。如只有1个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。4.6.3.2、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数比值=————————————————————低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值>2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。4.6.3.3、如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均

6、菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。4.6.3.4、如各稀释级平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。4.6.3.5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为<10个/g或ml。4.6.3.6、如有3个稀释级平均菌落数均在30～300之间，则以后2级计算级间比值报告。4.6.3.7、菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数

7、值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。4.6.4如果样品菌落总数超过标准的规定，按（4.4.5复检方法）进行复检和撰写结果报告。4.6.5复检方法将留存的复检样品依前法稀释复测两次，两次结果平均值都达到标准的规定，则判定检验样品合格；其中有任何一次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。5.相关表单、测试报告6.引用标准：GB7918.2、GB8368、GB8369、中华人民共和国药典、一次性使用卫生用品卫生标准GB15979—2002GB15980-1995一次性使用医疗用品

8、卫生标准