分子生物学复习资料29168.doc

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1、1.分子生物学的主要研究内容核酸的分子生物学；蛋白质的分子生物学；分子生物学技术2.理论上的三大发现40年代，Avery发现了生物遗传物质的化学本质是DNA;50年代，Walson-crick提出了DNA结构的双螺旋模型，搞清楚了生物遗传的分子机制;60年代，确定了遗传信息的传递方式：DNA→RNA→protein.3.技术上的3大发明“基因剪刀”—限制性核酸内切酶发明;载体（“车子”）－基因工程（技术）诞生的第2个技术准备;1970年，Baltimore和Temin等同时各自发现了逆转录酶，打破了遗传学的中心法

2、则，使真核基因的制备成为可能。4.证明遗传物质是核酸的试验：肺炎球菌转化试验；噬菌体转染试验5.B-DNA双螺旋结构1953年Watson和Crick提出DNA双螺旋结构模型。DNA是由两条反向平行的多核苷酸链组成的，分子的主链（磷酸核糖骨架）位于螺旋的外侧，碱基则堆积于螺旋的内部，两条多核苷酸链通过碱基间的氢键相结合。6.双螺旋模型参数直径20Å；螺距为34Å（任一条链绕轴一周所升降的距离）；每圈有10个核苷酸（碱基）；两个碱基之间的垂直距离是3.4Å。螺旋转角是36度；有大沟和小沟配对碱基并不充满双螺旋空间，

3、且碱基对占据的空间不对称。7.大沟中碱基差异容易识别，往往是蛋白质因子结合特异DAN序列的位点。8.DNA的双螺旋结构稳定因素氢键；碱基堆积力，碱基处于疏水环境中；磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和，离子键；范德华力9.B-DNA来自相对湿度为92％所得到的DNA钠盐纤维；还发现了A、C、D、E等右手双螺旋和左手双螺旋,Z构象等形式。在溶液中，DNA一般为B型。但在水的活度降低时，就转变为A型。自然状态下，A-DNA可能存在于DNA-RNA的杂交分子，和双链RNA分子中。与B-DNA相比，Z-DNA更为细长。

4、有证据表明，Z-DNA存在于天然DNA中，但量极微小，有些证据表明，Z-DNA的存在与基因表达的调控有关。三种DNA双螺旋构象比较ABZ外型粗短适中细长螺旋方向右手右手左手螺旋直径2.55nm2.37nm1.84nm碱基直径0.23nm0.34nm0.38nm每圈碱基数1110.412碱基倾角(度)1919大沟很窄很深很宽较深平坦小沟很宽、浅窄、深较窄很深10.DNA和RNA的碱基有共轭双键，而使核酸在240~290nm有光吸收，最大吸收在260nm附近。11.影响Tm值的因素18GC含量，高则高；盐浓度，高泽高

5、，但有一定范围；有变性剂存在，如尿素，降低；极端pH条件的影响12.DNA复性条件有足够的盐浓度以消除磷酸基的静电斥力，常用的盐浓度为0.15至0.50mo1/L的NaCI；有足够高的温度以破坏无规则的链内氢键，但又不能太高．否则配对碱基之间的氢键又难以形成的。一般使用比Tm低20℃-25℃的温度。13.影响DNA复性过程的因素阳离子浓度；复性反应的温度；低于Tm值25℃左右(60-65℃)；S.S,DNA的初始浓度C0S.S.DNA分子的长度（片段的大小）；DNA分子中,dNt的排列状况(随机排列,重复排列)。

6、14.DNA的变化情况：DNA在水溶液中,构型偏B型状态;DNA以10.5bp/helix为最稳定构型;小于10.5bp/helix向正超螺旋发展(紧缩态);大于10.5bp/helix向负超螺旋发展(松弛态);天然的DNA都是负超螺旋;但一些生命活动过程中存在正超螺旋.15.DNA超螺旋结构形成的意义:使DNA形成高度致密状态从而得以装入核中；推动DNA结构的转化以满足功能上的需要,如负超螺旋分子所受张力会引起互补链分开导致局部变性，利于复制和转录。16.拓朴异构酶可分I型和II型两类拓扑异构酶I通过使DNA的

7、一条链发生断裂和再连接，能使超螺旋DNA转变成松弛型环状DNA，每催化一次可消除一个负超螺旋，即使L增加１，反应无需供给能量；拓扑异构酶II则刚好相反，可使松弛型环状DNA转变成负超螺旋DNA，每催化一次，L减少２，可引入负超螺旋。拓扑异构酶II亦称促旋酶，它可以使DNA的两条链同时断裂和再连接，当它引入超螺旋时需要ATP提供能量。17.DNA的序列分析化学法（Maxam-Gilbert)测序原理：化学法是用化学试剂在A、G、C、T处特定地裂解DNA片段，产生一簇各种长度的短链（等差数列n=1），经过PAGE和放

8、射自显影后，可以直接读出DNA的顺序。用放射性核素标记待测DNA一侧末端；将标记DNA分为G、A+G、C+T、C4个反应体系；用不同的化学试剂处理不同反应体系，随机断裂DNA片段某种碱基中的任何一个，产生一组一端为放射线标记的末端，另一端为不同大小的DNA片段的混合物；电泳分离，放射自显影得到互相错落的梯形图谱，即可读出DNA序列。1818.病毒的核酸类型单股正链RNA病