Waters高效液相色谱维护与保养知识讲解.ppt

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1、Waters液相色谱维护保养以下课件是我在使用、操作、高效液相色谱仪十年中积累的经验，以及集合外部学习的经验所写，如有讲的不好、错误之处，请大家及时指出，我们共同学习！质检：Waters高效液相色谱常见故障与解析第一部分常用术语第二部简述HPLC的组成第三部分主要讲液相常见故障与解析

2、第四部分简谈示差检测的原理第五部分：色谱柱的维护与保养术语6、基线噪声:没有溶质通过检测器时，检测器输出信号的随机扰动变化。（就是没有打进样品而直接查看基线时所产生的杂峰）7、基线漂移：基线随时间的增加朝单一方向的偏离称为漂移。反映的是信号连续的递增和递减。

3、产生原因：电源电压不稳、色谱系统未达到平衡、固定相流失、流动相的变化、温度和流量的波动术语8、色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线。9、峰底：峰的起点与终点间的直线10、峰高：在峰的两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离。11、半峰宽（W1/2）：通过峰高的中点做平行与峰底的直线，与其峰两侧相交两点间的距离。12、峰面积（A）：峰与峰底间的面积，又称作响应值。13、拖尾峰：后沿较前沿平缓的不对称峰。14、前伸峰：前沿较后沿平缓的不对称峰术语15、死时间（t0）:不被固定相滞留的组分，从进样到出峰最大之所需的时间1

4、6、保留时间（tR）：组分从进样到出峰最大之所需的时间。17、死体积（V0）：不被固定相滞留的组分，从进样到出峰最大之所需的流动相的体积18、柱外体积 ：从进样系统到检测器之间色谱柱以外的液路部分中流动相所占有的体积。19、淋洗体积 ：从进样开始计算的通过色谱柱的实际淋洗体积术语20、反相色谱柱反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18

5、（ODS）、C8（MOS）、C4（B）术语21、排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。它类似于分子筛的作用，按分子大小进行分离。试样进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙以及孔穴旁流过。在试样中一些太大的分子不能进入胶孔而受到排阻，因此就直接通过柱子，首先在色谱图上出现，一些很小的分子可以进入所有胶孔并渗透到颗粒中，这些组分在柱上的保留值最大，在色谱图上最后出现。例如：我们常用的ks-802色谱柱第一部分术语22、面积归一法：将所有峰的面积总和定为1，测量各峰的面积和色谱

6、图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。是包含水分在内的一个计算结果。第一大部分术语23.面积外标法：外表法就是用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线,测出样品的峰面积或峰高,在标准曲线上查出其对应的浓度,这是最常用的一种定量方法通过进标样建立一个校正曲线（一般是6针标样）。校正曲线的横坐标是标样的浓度（含量），纵坐标是峰面积；校正曲线就相当于：Y=aX+b的公式。校正曲线建立好后样品的峰面积带入方程就可以得到相应的浓度（含量）。数据分析系统输液系统泵以及流动相进样系统进样阀分离系统-色谱柱检测系统11

7、第二部分HPLC的组成数据处理系统Waters515泵输液系统——输13输出流量恒定压力平稳足够的动力高压输液泵Waters2414示差检测器15检测系统进样系统16手动进样数据处理系统N2000色谱工作站18第三部分液相常见故障及解决方案19从泵的压力变化推测原因解决方法1、电源问题1、接通电源，开机2、保险丝被烧坏2、更换保险丝3、柱塞杆折断4、更换柱塞杆4、泵头内有空气5、启动泵抽出空气5、流动相不足6、吸滤头堵5、补充流动相6、更换或超声入口滤头7、单向阀损坏7、更换单向阀8、漏液8、拧紧或更换手紧接头A、泵内没有压力显示，没有流

8、动相流动20从压力变化推测原因解决方法1、电源问题1、接通电源，开机2、保险丝被烧坏2、更换保险丝3、柱塞杆折断4、更换柱塞杆4、泵头内有空气5、启动泵抽出空气5、流动相不足6、吸滤头堵5、补充流动相6、更换或超声入口滤头7、单向阀损坏7、更换单向阀8、漏液8、拧紧或更换手紧接头A、没有压力显示，没有流动相流动21原因解决方法1、柱塞杆折断1、更换柱塞杆2、压力传感器损坏2、更换压力传感器B、流动相流动正常，但没有压力显示B、泵内有液流出，但使没有压力显示22原因解决方法1、流速设定过高1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞2、a、反冲色谱柱b

9、、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀3、a、使用恰当的流动相b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱5、柱温过低5、提高温度6、保护柱阻塞6、清洗或更换保护柱7、在线过