大肠菌群快检纸片.ppt

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1、大肠菌群快速检测纸片法山东省疾病预防控制中心阚方琦汇报提纲1大肠菌群和粪大肠菌群的定义2大肠菌群快检纸片法的检测原理3大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法4大肠菌群快检纸片法的结果判定5影响判定结果的因素6大肠菌群快检纸片的应用现状及效果7大肠菌群快检纸片的质量控制8使用大肠菌群快检纸片注意事项大肠菌群和粪大肠菌群的定义1.大肠菌群：大肠菌群（ColiformBacteria)系指一群在37℃培养24h能分解乳糖产酸产气的需养或兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。它是细菌卫生学中的一项重要指标。2.粪大肠菌群：粪大肠菌群(Fae

2、calColiform)是大肠菌群中的一部分，在37℃和44.5℃均能生长并发酵乳糖产酸产气，主要来自粪便。将能在44.5℃生长并发酵乳糖产酸产气的这一部分大肠菌群成为粪大肠菌群。粪大肠菌群数可以作为被粪便污染的评价指标。大肠菌群和粪大肠菌群的定义总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如将培养温度再升高至44．5℃，则不再生长，而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃左右生长，如将培养温度升高至4

3、4．5℃仍可继续生长。大肠菌群和粪大肠菌群的定义因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。在37℃培养生长的大肠菌群，包括粪大肠菌群)为“总大肠菌群”(Totalcoliform)；在44．5℃培养的大肠菌群，为“粪大肠菌群”(Fecalcoliform)。大肠菌群快检纸片的应用现状■大肠菌群的检验，传统方法是乳糖胆盐试管发酵法。上世纪90年代，大肠菌群快速检验的纸片法被纳入食（饮）具、公共场所卫生和医院感染等待测物体表面消毒卫生标准，作为餐具、饮具或其它物体表面消毒效果检测的法定方法之一。

4、随即在全国卫生、疾控、环保等部门迅速推广使用，并有了商品供应。此后，又将该法应用到食品、饮料、水质、医疗机构污水污泥等样品的大肠菌群检测。作为单位自检或部门行业、地方标准。大大提高了工作效率。大肠菌群快检纸片的应用现状为了维护市场秩序，保障大肠菌群检测的可靠性，原卫生部食品卫生监督检验所（现为中国CDC营养与食品安全所)在全国范围内开展了对大肠菌群快检纸片产品的跟踪质量调查,筛选出时为山东省卫生防疫站等10家单位作为国内定点生产单位。并每年进行至少一次抽查检验，直到2004年，由于我们的产品质量一直名列前矛，而被定为免检

5、产品。大肠菌群快检纸片的应用现状纸片法检测大肠菌群，简便易行，节省成本，结果准确，工作效率高，是微生物检验诸多快速方法中比较成熟的方法之一，已被广大卫生检验者所接受。目前已广泛应用于食品、餐饮业、卫生、环保、水质检验等。大肠菌群快检纸片的应用现状实际应用效果举例：①对食饮具的检测结果②对冷冻饮品的检测结果③对水的检测结果GB2009年3月1日实施的《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》，将乳糖胆盐培养基改为月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，并不影响纸片法的应用。无论是乳糖胆盐、LST或是纸片法，都遵循了大肠菌群的基本概念

6、，其检测原理都是发酵乳糖产酸产气。大肠菌群快检纸片法的检测原理1.反应系统：①大肠菌群细菌在生长繁殖时，分解乳糖产酸乳糖→→葡萄糖+半乳糖葡萄糖→→丙酮酸→→乙酸+甲酸②甲酸→→H2+CO22指示系统：①产酸会通过溴甲酚紫由紫色变黄色来显示；②脱下的氢可与无色可溶性氯化三苯四氮唑（TTC受氢体）发生氧化还原反应，形成不溶性红色络合物三苯甲替（Formazan）。大肠菌群快检纸片法的检测原理3.大肠菌群快检纸片（以下简称“纸片”）就是根据上述原理，以无菌层析滤纸为载体，吸附一定量的乳糖、指示剂（溴甲酚紫和TTC）、蛋白胨

7、、抑菌剂等，在无菌条件下恒温干燥制成。大肠菌群细菌通过溴甲酚紫指示剂显示发酵乳糖产酸使纸片变黄，通过TTC与脱下的H发生氧化-还原反应,在细菌生长的菌落处形成红色斑点（或红晕）。这也是现行国标制定阳性结果判定标准的理论依据。大肠菌群快检纸片法的检测原理众所周知，酶是一种蛋白质，其活性随温度和pH等变化而改变，在高温和极端酸性或碱性情况下，可完全丧失活性而失去脱氢的能力。受氢体的作用也可能受pH的影响，因此影响酶活性和导致pH异常的任何因素均可影响检测结果。大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法1餐饮具和待测物体表面用纸片：组

8、成和性状：每份2张5×5cm纸片，干燥纸片为灰白色或淡绿色，加中性水湿润后为青紫色。使用方法：将纸片用适量无菌蒸馏水浸湿（无多余水分），贴于食饮具内侧表面或其他待测物体表面规定位置，压实，使纸片与物体面充分接触，30秒后取下，放于无菌袋内，37℃培养16-18h观察结果。±1大肠菌群快检纸片的种类及其使用方法2食饮品