乳品安全标准规范文件：食品微生物学检验 大肠菌群计数.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.3—2010食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Enumerationofcoliforms2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.3—2010前言本标准代替GB/T4789.3-2008《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》。本标准与GB/T4789.3-2008相比，主要修改如下：——修改了标准的中英文名

2、称；——“第二法大肠菌群平板计数法”的平板菌落数的选择范围修改为“15CFU～150CFU”；TM——删除了“第三法大肠菌群Petrifilm测试片法”。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB4789.3-1984、GB4789.3-1994、GB/T4789.3-2003、GB/T4789.3-2008。IGB4789.3—2010食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数1范围本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。本标准适用于食品中大肠

3、菌群的计数。2术语和定义2.1大肠菌群coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。2.2最可能数mostprobablenumber，MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃。3.2冰箱：2℃～5℃。3.3恒温水浴箱：46±1℃℃。3.4天平：感量0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移

4、液器及吸头。3.8无菌锥形瓶：容量500mL。3.9无菌培养皿：直径90mm。3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11菌落计数器。4培养基和试剂4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：见附录A中A.1。1GB4789.3—20104.2煌绿乳糖胆盐（BrilliantGreenLactoseBile，BGLB）肉汤：见附录A中A.2。4.3结晶紫中性红胆盐琼脂（VioletRedBileAgar，VRBA）：见附录A中A.3。4.4磷酸盐缓冲液：见附录

5、A中A.4。4.5无菌生理盐水：见附录A中A.5。4.6无菌1mol/LNaOH：见附录A中A.6。4.7无菌1mol/LHCl：见附录A中A.7。2GB4789.3—2010第一法大肠菌群MPN计数法5检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种LST肉汤管36℃±1℃48h±2h不产气产气BGLB肉汤36℃±1℃48h±2h不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表报告结果图1大肠菌群MPN计数法检验程序

6、6操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。6.1.3样品匀液的pH值应在6.5

7、～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。3GB4789.3—20106.1.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。6.1.5根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超

8、过15min。6.2初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。6.3复发酵试验用接种环从产气的L