VEGF在犬恒牙胚发育中表达及意义.doc

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1、VEGF在犬恒牙胚发育中表达及意义［摘要］目的：探讨犬乳恒牙替换过程中血管内皮生长因子(VEGF)在犬恒牙胚发育中的表达及意义。方法：分别对乳牙期、替牙期、恒牙期本地犬取牙胚及其周围组织，制备石蜡切片，进行HE染色和牙胚内VEGF的免疫组化染色，用彩色病理图像分析系统分析各组染色强度灰度值。结果：乳牙期、替牙期犬牙胚的成牙本质细胞VEGF的免疫组化强度明显高于另外一组，成釉细胞中也有阳性信号。结论：VEGF可能参与恒牙胚的发育。［关键词］犬恒牙胚；血管内皮生长因子；成牙本质细胞;成釉细胞［中图分类号1R780.2［文献标识码］A［文章编号］1008-6

2、455(2007)04-0510-02血管内皮生长因子(VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF)是由血小板、巨核细胞、内皮细胞和成骨细胞或肿瘤细胞合成和分泌的多功能细胞素，具有促进内皮细胞增殖、血管生成、增加血管通透性以及血管维持等功能。许多研究表明，VEGF在胚胎发育过程中协调着细胞外基质的改建、血管增生的关系。而在恒牙胚发育中的作用却未见相关报道。本实验主要通过对犬恒牙胚成牙本质细胞中VEGF的表达进行研究，探讨VEGF在此过程中的作用。1材料和方法1.1材料及分组：动物选用本地犬共6只，分为3组,每组各2只。A组

3、：乳牙牙根稳定犬（6周龄），体重2.5Kg；B组：乳牙牙根吸收犬（12〜16周龄），体重6Kg；C组：成年恒牙列犬（20周龄）,体重lOKgo1.2试剂：兔抗鼠和人VEGF多克隆抗体（SantaCruz公司，美国）；SABC免疫组化检测试剂盒（北京中杉）；DAB显色试剂盒（北京中杉）O1.3切片标本制作及观察：分别将实验犬以速眠新II注射液按0.2ml/Kg肌注麻醉，解剖分离双侧颈动脉后断头处死，颈动脉插管，用生理盐水冲洗，4%甲醛固定液（含1/1000DEPC）进行灌注组织内固定，分离上、下颌骨，4%甲醛固定液外固定24h,上、下颌骨于甲酸、甲酸钠脱

4、钙液中4C脱钙，4周后分切成小块，再脱钙4周。脱钙后，分切、修整、酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、石蜡包埋，制作Sum厚石蜡切片。石蜡切片脱蜡至水，常规HF染色，每只犬取5张切片共30张，每张切片光学显微镜下观察根尖组织。1.4免疫组化染色及图像分析：切片脱蜡至水，一抗为兔源性抗体，稀释度1：80,其余步骤按试剂盒进行。用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像分析系统分析染色强度的灰度值，每个时期10张切片，每张切片随机选取4个成牙本质细胞进行测量。2结果A组：8周犬乳牙根未发生生理性根吸收，恒牙胚牙冠发育处于牙体组织形成期，牙本质、牙釉质基质开始形成。

5、成釉细胞、成牙本质细胞高柱状，胞核椭圆形，远离基底膜,整齐排列，极性倒置明显。此时可见恒牙胚内成牙本质细胞及成釉细胞染色阳性，染棕黄色。空白对照组染色阴性。B组：12〜16周犬乳牙根发生生理性吸收，恒牙胚冠部牙本质、牙釉质进一步形成和矿化，成釉器萎缩、上皮根鞘向根方生长，形成上皮隔，并可见上皮根鞘发生断裂。此时恒牙胚内成牙本质细胞及成釉细胞染色阳性，空白对照组染色阴性。C组：20周成年犬恒牙列，乳牙已脱落，恒牙萌出。恒牙成牙本质细胞染色阴性。经彩色病理图像分析系统分析，成牙本质细胞染色灰度值分析见表lo经LSD检验，A、B组与C组间P<0.05,即成牙

6、本质细胞免疫组化染色强度A、B组与C组间有显著性差异，说明成牙本质细胞表达VEGF的强度不同。A组与B组间P>0.05,即成牙本质细胞免疫组化染色强度A组与B组间无显著性差异。3讨论VEGF的研究始于1989年，VEGF是一种由亚基内及亚基间二硫键交联形成的同源二聚体糖蛋白。目前已发现VEGF家族至少包括五大成员:VEGF—A、VEGF—B、VEGF—C、VEGF-D并口PGF（placentalgrowthfactor,胎盘生长因子），分别定位于不同的染色体。目前已知VEGF家族有3个受体：VEGFR-1、VEGFR—2、VEGFR—3,分别由f11

7、一1、f1k-1/KDR、fit-4基因编码。其共同特点是催化域内有酪氨酸激酶插入区，酪氨酸激酶的活性通过受体和配体结合而激活，由受体磷酸化而刺激蛋白酶和Ca离子内流，对细胞的生长和分化起重要作用。研究表明，VEGF是内皮细胞特异性最强的丝裂原，具有特异性促进血管增殖的作用。在牙齿发育早期，内皮细胞分泌VEGF促进血管形成。大量血管侵入牙乳头、牙囊，以保证组织形成所需的营养。Aida研究表明，VEGF表达于内、外釉上皮及星网层细胞，调控成釉细胞的成熟。当成釉细胞成熟后，对牙乳头发生诱导作用，分化为成牙本质细胞。成熟后的成牙本质细胞已具备合成蛋白质的功能

8、。本实验也发现：VEGF的阳性信号出现于发育中的恒牙胚成牙本质细胞、成釉细胞中，镜下观察，两类