补骨脂对小鼠肝细胞形态、肝功能及线粒体膜电位的影响.pdf

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1、2014年1月中成药January2014第36卷第1期ChineseTraditionalPatentMedicineVo1．36No．1[科研报道]补骨脂对小鼠肝细胞形态、肝功能及线粒体膜电位的影响张秀娟。，曹慧琪，邢志华，季宇彬(1．哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心生物安全评价研究所，黑龙江哈尔滨150076；2．国家教育部抗肿瘤天然药物教育部工程研究中心，黑龙江哈尔滨150076；3．哈尔滨商业大学药学院，黑龙江哈尔滨150076)摘要：目的探讨补骨脂对小鼠肝功能的影响。方法选用昆

2、明种小鼠，连续灌胃28d，HE染色观察补骨脂对小鼠肝细胞形态的影响；紫外分光光度法测定补骨脂对小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性的影响；酶联免疫吸附法检测补骨脂对小鼠肿瘤坏死因子(TNF—)、白细胞介素一6(IL-6)活性的影响；流式细胞仪检测补骨脂对小鼠肝细胞线粒体膜电位(△m)的影响。结果补骨脂能引起小鼠肝细胞肿胀、坏死，血清ALT、AST、TNF．0I、IL-6活性增加；肝细胞线粒体膜电位(△m)随着给药剂量的增加显著降低。结论补骨脂连续服用对小鼠肝脏具有明显的损伤。关

3、键词：补骨脂；肝损伤；肝功能；细胞因子；线粒体膜电位中图分类号：Pc285．5文献标志码：B文章编号：1001—1528(2014)01-0160-03doi：10．3969／j．issn．1001—1528．2014．01．039补骨脂是中医临床治疗脾肾阳虚的常用补虚药物⋯。北京医用离心机厂LIM-2A；SUNRISE酶标仪，瑞士TE—传统医学认为补骨脂具有补肾助阳，固精缩尿，暖脾止泻，CAN公司；流式细胞仪，美国BECK—COULTER公司；O—纳气平喘等功效，主治肾虚冷泄，遗尿尿频，阳痿，遗

4、精，LYMPUSIX70倒置显微镜，Olympus公司。虚寒喘咳，腰膝冷痛等病症；现代药理学研究表明该药2方法具有扩张冠状动脉，抗菌，抗衰老的作用，对平滑肌有双2．1实验动物分组及给药小鼠4O只，随机分成4组，向调节作用，以及抗肿瘤等药理活性。补骨脂药材、炮分别为对照组、补骨脂组(6．0、3．0、1．5kg)，灌胃，制、化学、药理作用及临床应用等在国内外都有了多方面28d。的研究报道，但是长期使用补骨脂对机体损伤方面的研究2．2补骨脂对小鼠肝脏组织形态学的影响取小鼠肝脏适甚少。故本课题旨在通过观察

5、肝脏病理组织、血清学、细量切成小块，PBS冲洗，石蜡包埋，H．E．染色。胞学变化规律，分析补骨脂对小鼠肝损伤作用，并探讨其2．3补骨脂对小鼠血清ALT、AST的影响眼球取血，安全用量范围，为今后安全、合理、有效用药提供理论3000r／min离心10min，分离血清，紫外分光光度法测定基础。ALT、AST活性。1材料2．4补骨脂对小鼠血清TNF—、IL-6活性的影响眼球取1．1药物补骨脂购自哈尔滨人民同泰药店，经哈尔滨商血，3000r／min离心10min，分离血清，酶联免疫吸附试业大学药学院金哲雄

6、教授鉴定为豆科补骨脂属植物补骨脂验测定TNF一、IL-6活性。Psoraleacorylifolia的干燥成熟果实。2．5补骨脂对小鼠肝细胞线粒体膜电位的影响1．2动物昆明种小鼠(20±2)g，雌雄各半，合格证为2．5．1肝细胞的分离纯化小鼠肝脏适量切成小块，PBS黑动字第POOl01006号，由黑龙江中医药大学实验动物中冲洗，胰酶37℃消化15rain，小牛血清中止，300目尼龙心提供。网过滤，1000r／min，10rain，弃上清，收集沉淀细胞，1．3试剂与仪器谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨

7、酶1000r／min离心10rain，弃上清，调整细胞密度约为1×(AST)、肿瘤坏死因子一13t(TNF—oL)试剂盒、白细胞介素一610个／mL。(IL一6)试剂盒，南京建成生物工程研究所；Adventurer万2．5．2线粒体膜电位的测定取500细胞悬液，加染分之一电子天平，OHAUS公司；高速离心机，Beckman色液500tzL，使其终质量浓度为10g／mL，37℃孵育30Coulter；超细匀浆器，德国FLUKUF6／10；低速离心机，rain，加1mLPBS，1000r／min离心1

8、0min，弃上清，加收稿日期：2013-05—14基金项目：黑龙江省自然科学基金项目(D201043)作者简介：张秀娟(1962～)，女，教授，博士生导师，研究方向：抗肿瘤药物。E-marl：zhangmu77@163．COB通信作者：季宇彬，男，教授，博士生导师。1602014年1月中成药January2014第36卷第1期ChineseTraditionalPatentMedicineVoI_36No．1性低剂量组较空白组有增加趋势但没有统计学意义，高、刘树民．中药药物性肝损害