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时间:2020-05-23
《铝吸附甲型肝炎灭活疫苗抗原解离方法研究.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、国际流行病学传染病学杂志2014年8月第4l卷第4期InterJEpidemiolInfectDis,August2014,V01.41,No.4·249·铝吸附甲型肝炎灭活疫苗抗原解离方法研究王静华潘海桦顾春燕【摘要】目的建立铝吸附甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗中甲肝病毒(HAV)抗原的解离方法。方法选择2O%二乙醇胺1.25mL、10%TritonX-1000.2mL和PBS8.55mL混合液作为解离液A;pH7.2的3%(w/v)柠檬酸缓冲液作为解离液B;20%(w/v)柠檬酸三钠为解离液C。分别检测3种解离液在不同的解离条件下对铝佐剂甲型
2、肝炎灭活疫苗的解离情况,用ELISA法检测解离后的HAV抗原含量,计算抗原回收率,确定最佳解离液及解离条件,并验证其可重复性。结果3种解离液HAV抗原解离试验显示,解离液C在室温(20~28℃)条件下解离1h,HAV抗原的回收率最高,可达95%及以上,重复试验的变异系数均<10%。结论20%(w/v)柠檬酸三钠可作为铝佐剂甲肝灭活疫苗的首选抗原解离剂,该解离剂配方简单,操作简便,结果重复性好,准确度高。【关键词】肝炎病毒,甲型;灭活疫苗;解离液;铝佐剂;ELISAAmethodforantigendissociationofhepatiti
3、sAvirusinactivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvantWangJinghua*,PanHaihua,GuChunyan.*InstituteofViralDisease,ZhejiangAcademyofMedicalSc&nces,Hangzhou310013,ChinaCorrespondingauthor:GuChunyan,E-mail:gcy1358@163.com【Abstract】ObjectiveTodevelopamethodforantigendissociationan
4、dcontentdeterminationofhepatitisAvirus(HAV)inactivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvant.MethodsBufferA:20%diethanolamine1.25mL,1O%TritonX一1000.2mL,andPBS8.55mL;bufferB:3%w/v)citricacidwithpH=7.2;bufferC:20%(w/v)trisodiumcitrate.Theabove3bufferswereusedtodissociateHAVinact
5、ivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvantinvariousconditions.ThecontentofantigenofthoseresultantsampleswasdeterminedbyELISA,andthentherecoveryratewascalculatedtodeterminethebestbufferandconditionsofdissociation.Therepeatabilityofestablishedmethodwasverified.ResultsDissociat
6、iontestshowedthatwhenHAVinactivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvantwastreatedwithbufferCat20·28℃for1hour.therecoveryratewasthehighestof95%orabove.Coefficientofvariationofrepeatedtrialswaslessthan10%.Conclusions20%(w/v)tfisodiumcitrateisthebestbufferfordissociatingantigen
7、fromHAVinactivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvant.Thebufferiseasytoprepareandoperatewithgoodreproducibilityandhighaccuracy.【Keywords】HepatitisAvirus;Inactivatedvaccine;Dissociationbuffer;AluminiumAdjuvant;ELISA铝佐剂在甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗中的应用HAV抗原含量,体外法大大缩减了检测周期,但铝已有多年,铝吸附的甲肝灭活疫苗中抗
8、原含量是体佐剂吸附的疫苗不能直接用于抗原含量测定,需将现疫苗效力的最重要指标,早期疫苗的效力试验通病毒抗原与铝佐剂解离出来后再进行检测l2】。而过动物体内法进行测定。《中华人民共
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