磷脂酰肌醇蛋白多糖-3对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.pdf

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1、邰伯军，等．磷脂酰肌醇蛋白多糖一3对肝癌细胞增殖和凋亡的影响863论著／肝胆胰肿瘤磷脂酰肌醇蛋白多糖一3对肝癌细胞增殖和凋亡的影响邰伯军，姚敏，顾星，时运，蔚丹丹，陈洁，郑文杰，姚登福，陆少林(南通大学附属医院，临床医学研究中心，江苏南通226001)摘要：目的探讨shRNA干预磷脂酰肌醇蛋白多糖(GPC)一3基因转录对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将GPC一3一shRNA插入pGPU6／GFP／Neo质粒，转染人肝癌HepG2细胞，以WesternBlot和荧光定量PCR分别分析GPC一3蛋白和mRNA表达；以MTY法分析HepG2细胞增殖；以流式细

2、胞术、Annexin—V—PE／7一AAD及细胞凋亡一DNAladder等分析细胞周期及细胞凋亡率。结果shRNA1转染HepG2细胞，GPC一3mRNA沉默效率为89．3％，与GPC一3蛋白下调一致；以shRNA转染HepG2细胞，增殖抑制率为71．1％；细胞周期阻滞在G1期，细胞凋亡率达65．6％。结论资料显示shRNA干预GPC一3基因转录，可显著抑制肝癌细胞增殖，促进肝癌细胞凋亡。关键词：癌，肝细胞；磷脂酰肌醇蛋白聚糖类；基因沉默；细胞凋亡；细胞增殖中图分类号：R735．7文献标志码：A文章编号：1001—5256(2013)11—0863—0

3、4Efectsofsilencingglypican——3genetranscriptiononproliferationandapoptosisofhepatomacellsTAI＆n，YAOMin，GUXing，eta1．(ResearchCenterofClinicalMedicine，AffiliatedHospitalofNantongUniversity，Nantong226001，China)Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofsilencingglypican一3(GPC一3)genet

4、ranscriptionbyshRNAontheproliferationandapop—tosisofhepatom~cells．MethodsGPC一3一shRNAwasinsertedintopGPU6／GFP／Neovector，andHepG2cellsweretransfectedwiththevector．ThernRNAandproteinexpressionofGPC一3wasmeasuredbyfluorescencequantitativePCRandWesternblot；theproliferationofHepG2cells

5、wasevaluatedbyMTFassay；thecellcycleandapoptosisofHepG2cellswereanalyzedbyflowcflomet~．Annexin—V—PE／7一AADstaining．andapoptoticDNAladderkit．Resl

6、ltsAftertheHepG2cellsweretransfectedwithGPC一3一shRNA．theGPC-3mRNAsilencingratewasupto89．3％，inaccordancewiththedown—regulationofGPC一3prote

7、in；theproliferationinhibitionrateofHepG2cellswasashighas71．1％；theHepG2cellswerearrestedinGIphase．andtheapoptosisrateofHepG2cellsreached65．6％．ConclusionSilencingGPC一3genetranscriptionbyshRNAcansignificantlyinhibittheproliferationandpromotetheapoptosisofhepatomacells．Keywords：carc

8、inoma，hepatocellular；glypican；genesilencing；apoptosis；cellproliferation磷脂酰肌醇蛋白多糖一3(Glypican一3，GPC一3)基一3基因转录可抑制肝癌细胞增殖与进展l8J。为此，本因定位于人染色体Xq26．1区，蛋白分子中含膜性硫酸乙文构建GPC一3基因短发夹型RNA(shorthairpinRNA，酰肝素多糖蛋白，羧基末端与糖基磷脂酰肌醇共价结合shRNA)真核表达载体，经筛选、转染人肝癌(HepG2)细锚定于细胞膜，与wnt蛋白共受体调节Wnt／[3一catenin胞株，探讨

9、干预GPC一3基因转录对HepG2细胞增殖与信号通路，介导Wnt3a调节肝癌细胞分化与生长¨，