近年无锡市奶牛结核病的流行病学调查.pdf

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1、近年无锡市奶牛结核病的流行病学调查顾舒舒范锋(江苏省无锡市动物疫病预防控制中心214000)结核病是由结核分支杆菌引起的一种人畜共患慢性传染1材料与方法病。牛结核病主要是由牛分枝杆菌所引起，主要特征为在多1．1仪器种组织器官形成干酪样坏死、肉芽肿(结核结节)和钙化结精密电子天平、高速低温离心机、恒温培养箱、超净丁节病变。该病危害严重，被国际兽医局(OIE)列为B类动作台、显微镜、微量可调移液器、超纯化水机、电动推毛物疫病ll】．我国列为二类传染病。本病可经呼吸道、?肖化剪、微量金属注射器、注射兽用16#针头、游标卡尺、酶标道、交配等方式感染。在家畜中

2、，牛最易感染结核病，尤以仪等。奶牛多见，其次是水牛和黄牛(21。近年来．随着人们生活水1．2试蠢l】与耗材平的提高，对奶制品特别是牛奶需求量的增加。带动了奶牛牛型PPD、禽型PPD购自中国兽医监察所。业的迅猛发展．牛结核病也日益受到了密切关注。目前江苏BOVIGAMTM试剂盒购自瑞士Prionics公司。省奶牛结核病按照现阶段国家动物疫病监测计划分类标准属1．3被检动物二类地区。奶牛结核病不治疗．而采取严格的隔离、扑杀患2011-2013年间．无锡市所有存栏的奶牛，除初生犊牛、病牛的政策。怀孕后期母牛及隔离病牛外．其余均为调查对象。牛结核病的检测方法

3、大体可分为三类：第一类是病原学1．4试验方法检查法．如涂片染色镜检、细菌培养等，该法是最确实的方1．4．1单纯颈部皮试变态反应(SCT)法之一，但由于染色法检出的细菌只能说明有抗酸杆菌，不参照国家标准《动物结核病诊断技术(GBfr18645—能准确鉴定出结核分枝杆菌和非典型分支杆菌，因而缺乏特2002)}，对无锡市所有存栏奶牛采用SCT进行检测，使用国异性131；而细菌培养检出率低，结核菌生长缓慢，一般需产牛型PPD，剂量为2000U(IU)，头，分别于注射前和注射10—30d才能看到菌落[41．且有10～20％的病例结核菌培养失后72h测量皮肤厚度

4、，并计算出皮厚差，依据国家标准判断败1561．因此，该法在牛结核菌的临床诊断中不易推广。第二结果，对粗筛和二次复核均为可疑的判定为阳性。类是免疫学方法．如皮内变态反应、胶体金和ELISA等方1．4．25'-干扰素(IFN一^y)体外释放试验法，PPD皮内变态反应试验是目前最常用的奶牛结核病检测对所有规模奶牛场(存栏100头以上)随机挑选部分奶方法，我国普遍采用单纯颈部皮试变态反应(SCT)进行检牛，同时采用IFN一-y释放试验进行检测。奶牛尾静脉无菌采测，欧盟(EU)国家广泛使用比较皮试变态反应(CCT)进姐5ml／头，将采集的血液置于肝素钠抗凝管中

5、。轻轻颠倒混行检测，而胶体金和ELISA检测虽然简单易行，但目前实匀，使肝素钠溶解。室温下将血样运送到实验室，在采m后际价格昂贵．大规模实施的成本过高。第三类是分子生物学8h内进行刺激培养。将全血样品无菌分装至24孑L板中，每方法，如核酸探针、PCR和DNA图谱等方法．该法需特殊份血样分装3孑L，1．5ml／~[,。向各孔中分别无菌加入100txl的仪器设备．对实验室条件以及操作人员的技术要求较高，PBS、禽型PPD、牛型PPD．震荡混匀lmin。将含有血液与只适用于实验室研究，不适用于基层的推广应用。有报道抗原的24孔板置于37~C湿温培养箱中孵育

6、24h。次日从各培称，新型的_y一干扰素(IFN一)体外释放试验相比SCT和养孔吸取5001M血浆上清转入1．5ml离心管中．即为刺激产CCT而言，能保持较高的灵敏度和较好的特异性嘲。生的一干扰素上清。以Prionics公司购得的试剂盒检测牛全于2011～2013年间，对无锡市所有存栏的奶牛进行了奶血上清液中的一干扰素，具体操作参照试剂盒说明书进行。牛结核病的流行病学调查，本文旨在为无锡市奶牛结核病的结果判定标准：牛型PPD刺激上清的OD值一PBS刺激诊断和防治提供参考依据。上清的OD值1>0．1，且牛型PPD刺激上清的0D值一禽型相结合的原则，i年

7、来，无锡市奶牛结核病的发病率在一定程度上得到了控制。结核病阳性率下降幅度逐渐缩小，可能是由于全市奶牛的饲养量逐年减少，同时阳性牛在每年的筛一～⋯+比值查中被淘汰，结核病传染的风险降低，因此阳性率在降低的同时．下降幅度也逐渐缩小。3．2两种检测方法的对比2011～20l3年间，采用SCT和IFN一体外释放试验两种图2IFN-y体外释放试验的阳性数与SCT检测阳性数的比值方法。对l3个规模奶牛场的检测结果显示，SCT的阳性检率明显高于IFN一^y试验，而其阳性、阴性符合数却低于IFN一试验，因此IFN一-y试验具有更强的特异性。IFN一体外释放试验的阳性

8、数与SCT检测阳性数的比值-e-'SCT阳性率呈现逐年减小的趋势(见网2)，一方面说明SCT检测法存在．='