pace_mdq毛细管电泳系统操作手册

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1、P/ACEMDQ毛细管电泳系统操作指南(32Karat软件5.0版本)BECKMANCOULTER公司生命科学研究部市场部2002年9月15日1/81目录第一章毛细管电泳系统导论第二章P/ACEMDQ毛细管电泳系统组成的概述第三章启动32Karat软件第四章直接控制第五章方法编辑第六章系统运行第七章积分第八章校准第九章定性分析第十章使用迁移率第十一章建立报告2/81第一章毛细管电泳仪的导论概述TM本资料说明毛细管电泳仪的一般原理和以P/ACEMDQ为主机，带有紫外、二级管阵列和激光诱导荧光检测器的基本操作指导。一般说明TMP/ACEM

2、DQ是根据各种电泳的分离机理；在熔融石英玻璃毛细管中进行实际化合物分离的仪器。TM在P/ACEMDQ中，在压力、真空或电压的作用下样品进入毛细管后，在高电压的作用下，样品中的各种化合物以不同的淌度通过毛细管。检测这些化合物有两种方法。其一利用化合物对紫外光具有吸收的原理，化合物在毛细管中通过毛细管的窗口，应用紫外或二极管阵列检测器检测到吸收值，将吸收光信号变成电信号后传给计算机或积分仪，由计算机制作成电泳图而被分析。第二个方法是利用化合物对特定发射光具有吸收并产生激发光的原理。这里由激光诱导荧光（LIF）来完成。在毛细管中的物质吸收激

3、光诱导荧光检测器所产生的特定波长的发射光，激光诱导荧光检测器再测定、并记录其产生的激发光。最后由计算机完成电泳图。TMP/ACEMDQ可以分离各种不同的样品，包括：肽类、蛋白、核酸、离子、手性化合物和药物。毛细管电泳比其他分析仪器需要更为少量的样品（5-30微升，进样的量仅仅5-50纳升）。它提供比其他分离技术更为理想的分析手段。电泳基本模式CapillaryZoneElectrophoresis(CZE)毛细管区带电泳毛细管区带电泳也称为自由溶液毛细管电泳，是毛细管电泳中最简单的一种形式。其分离机理是各被分离物质的净电荷与质量之间比

4、值的差异，不同离子按照各自表面电荷密度的差异以不同的速度在电解质中移动，而导致分离。毛细管区带电冰要求缓冲液具有均一性，毛细管内各处具有恒定的电场强度。3/81MicellarElectroPhoresisCapillaryChromatography（MECC）胶束电动毛细管色谱在MECC中，当把离子型表面活性剂加入缓冲液中，并且其浓度足够大时这种表面活性剂的单体就结合在一起，形成一个球体我们称其为胶束。目前，以十二烷基硫酸钠（SDS）使用最为普遍。在MECC的系统中存在两个相：流动的水相和起到固定相作用的胶束相，被分离物在这两个相

5、之间分配，由于它们在胶束中具有保留能力而产生不同的保留时间。和区带电泳一样，缓冲液在管壁处形成正电，使其显示强烈的向负极移动的电渗流，而SDS胶束由于其外壳带负电性具有向正极迁移的倾向。一般情况下，电渗流的速度大于胶束的迁移速度。因此，迫使胶束最终以较低的速度向负极移动。我们把这个移动的胶束固定相也称之“准固定相”。在胶束电动毛细管色谱中，中性粒子之间的分离是根据其本身的疏水性的不同而达到的，不同疏水性的粒子和胶束的相互作用不同，疏水性强的作用力就大，保留时间就长；反之，保留时间就短。CapillaryGelElectrophores

6、is（CGE）毛细管凝胶电泳凝胶电泳是用凝胶物质作为支撑物进行分离的区带电泳。凝胶是一种固态分散体系，它具有多孔性，具有类似于分子筛的作用。被分离物在通过装入毛细管的凝胶时，按照各自分子的体积大小逐一分离，分子体积大的首先被分离出来，其后是较小的分子。CapillaryIsoelectricFocusing(cIEF)毛细管等点聚焦两性电解质在分离介质中的迁移形成pH梯度，各种具有不同等电点的蛋白质按照这一梯度迁移到它们的等电点的那个位置，并在该点停下，由此产生一条非常窄的聚焦区带，并使不同的蛋白质聚焦在不同的位置上。毛细管等电聚焦的

7、运行过程，可分为三个步骤：A进样。把样品与两性电解质混合并进样。B聚焦。加高电压3－4分钟，使整个毛细管长度范围内建立一个pH梯度，以便让样品在毛细管中向各自的等电点聚焦点移动，形成一条由不同组分排列的带子。4/81C迁移。阴极的缓冲液换成盐类后，再加上电压，使末端引起梯度降低，让已聚焦组分一个一个通过检测器。CapillaryElectrochromatography（CEC）毛细管电色谱在毛细管中装填了液相色谱的各种填料；相当于固定相，应用电泳中的EOF电渗流作为动力，电解质相当于流动相。各种小分子、极性或中性化合物在两相之间迁移

8、而形成分离。毛细管电色谱尤其适应于小分子（药物）的分离。5/81第二章P/ACEMDQ毛细管电泳系统组成的概述P/ACEMDQ毛细管电泳系统的主要组成部分有:放置样品瓶、缓冲液和其它溶液的盛盘、系统连接装置、电极和高压电