塘泥中高效聚磷菌GPN1的筛选和鉴定-论文.pdf

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1、：j謇泥中高效聚磷茵GPN1的筛选和鉴定余米孙福临李能章马跃岗姚维志苏胜齐但言(1西南大学动物科技学院，重庆北碚400716；2重庆市水产科学研究所，重庆渝北401121)摘要：对采自北碚龙凤溪养殖河段等处的底泥进行细菌分离培养，获得130余个形态不同菌落。采用poly—P吕氏美蓝染色法、poly-P的Mbert染色法和PHB苏丹黑染色法对每个菌株进行初筛，结果得到6株三项染色效果均呈阳性的细菌；进一步通过蓝白斑试验验证了这6株菌株均有聚磷特性；经过比较厌氧释磷和好氧最高磷含量，确$．KGPN1为高效聚磷茵

2、。在此基础上，通过茵落特征、电子显微镜观察，并结合生理生化特性和16SrDNA的鉴定，得出GPN1属于假单胞茵(Pseudomonassp．)。关键词：塘泥；聚磷菌；筛选；鉴定磷是渔业水体中初级生产力最主要的限制1材料和方法因子之一，池塘增施磷肥能明显提高鱼产量1．1材料⋯1．1．1底泥样品：西南大学试验鱼池底泥、西南。但是近年来，池塘养殖中过量投放富含磷、氮等营养元素的饵料和肥料，不仅导致养大学校农场山坪塘底泥、北碚龙凤溪养殖段下游水深lm@底泥、北碚污水处理厂发酵池底泥殖废水排放中磷含量剧增，水质恶化，

3、而且导以及桑树林土壤。致底泥中的磷大量沉积并成为潜在污染源。1．1．2培养基如何有效提高养殖水体中磷的利用效率和减少LB培养基：酵母浸膏5g、NaCl5g、蛋白养殖外排废水中的磷含量，越来越成为绿色生胨lOg、水lO00mL，pH值为7．0—7．2。态养殖关注的一个重要问题。聚磷菌是广泛YG：f~养基：酵母浸膏lg、葡萄糖lg、生长在富磷污泥或池塘底泥中的细菌，能将溶K2HPO~0．3g、KHPO,0．25g以及MgSO0．2g、水解态的磷转化为难溶性磷，在城市污水处理中lO00mL。已经得到广泛的应用。目

4、前，针对处理养殖MOPS培养基：100mL的10×MOPS混合物污水的聚磷菌研究并不多见。因此，从富磷水取50mL置于两个250mL的三角瓶中，向一个三体底泥中筛选聚磷菌并应用到养殖废水的处理角瓶中加入0．00866gK2HPO，成为限磷培养中去，具有重要的研究意义和实践价值。本文基；向另一个瓶中加入0．1732gK2HPO，成为报道了一株采自养殖水体底泥的聚磷菌的筛磷过量的培养基。向两种培养基中均加入维生选、鉴定与聚磷能力分析结果，以期为养殖废素溶液和去离子水，分别用细菌滤器过滤后，水的生物处理技术提供基

5、础资料和参考。分装于已灭菌的150mL的三角瓶中。CHONGQ~GFISHERY}■衄1．2方法l～2min；水洗，吸干，备油镜镜检。阳性结1．2．1聚磷菌株的分离和筛选果是类脂粒呈黑色，菌体其他部分呈红色。1．2．1．1聚磷菌的分离和富集方法1．2．1．3蓝白斑初筛聚磷菌底泥和土壤样品中细菌分离和富集的都使将纯化后的菌体分别接种到限磷和高磷的用平板稀释涂布法，分离富集步骤如下：MOPS一葡萄糖培养基，于3O℃的培养箱中培养称取底泥或者土壤样品10g置于装有100l～2d。mL一级水的三角瓶(250mL)中

6、，加入少量小玻1．2．1．4好氧培养筛选高效聚磷菌璃球，3O℃、120fmin，摇床培养0．5h，静将初筛聚磷菌接种到装有LB液体培养基的止。试管中，过夜培养后，按1％的量加入两个250加4．5mLY~菌水于灭菌过的5mL的离心管mL的锥形瓶中摇床培养，在不同的生长阶段中，将0．5mL上清液加入离心管中，混匀，制分别测定菌体的生长量OD600、菌体的含磷成浓度梯度为10—4，10—3，10—2，10一l的菌量、上清液磷浓度。悬液。取50mL菌悬液于50mL的离心管中，吸取0．1n菌悬液于YG平板上，每个浓度

7、12000r／min离心5rain，用无菌水溶解，再离梯度涂布三块平板，放置于30℃培养箱中培养心，重复3次得湿菌体，于105℃烘干测菌体干2-3d。重，做三个平行样，以三个样的平均值作为菌从YG平板中挑出不同形态特征的菌落，体干重。在YG固体平板上划线纯化，然后转接~IJYG的无菌条件下，取好氧培养到一定阶段的菌斜面培养基上，培养三天后保种。液80mL，12000r／rain离心5min，用无菌水洗去将斜面试管取出，于4℃冰箱保藏。菌体上的培养基，用无菌水溶解，再离心，重1．2．1．2细菌菌体的poly—

8、P和PHB染色复3次得湿菌体；将菌体用无菌水溶解后，用菌体poly—P吕氏美蓝染色法：按常规方法过硫酸钾进行消解，按总磷测定方法测菌体磷制片；滴加吕氏美蓝染液，5min或更长；用水量，做三个平行，取平均值。结合菌体干重算冲去染液，吸干，备油镜镜检；异染粒呈深蓝出菌体含磷量百分比。色，菌体其他部分呈浅蓝色'。上清液浓度的测定：取好氧培养后的菌液poly—P的Albert~色法：按常规方法制在12000r／min离,