副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重PCR检测方法的建立及应用-论文.pdf

《副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重PCR检测方法的建立及应用-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、动物医学进展，2013，34(12)：29-33ProgressinVeterinaryMedicine副猪嗜血杆菌和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌双重PCR检测方法的建立及应用余远迪，曾泽，岳华，张斌(西南民族大学生命科学与技术学院，四JIl成都610041)摘要：针对副猪嗜血杆菌(Hps)16SrRNA序列和猪传染性胸膜放线杆菌(App)ApxlVA基因序列各设计一对引物，分别能扩增大小为822bp和346bp的目的基因片段，建立快速鉴定Hps和App的双重PCR方法。特异性试验表明，该方法对波氏杆菌、巴氏杆菌、大肠埃

2、希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、猪圆环病毒2型、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明，该方法与单项PCR的敏感性一致，最低可检测核酸浓度Hps38pg／mL，App3．8pg／mL~最低检测细菌含量Hps8．9c{u，App26．9cfu。利用该方法检测Hps和App参考菌株、临床分离株、36份临床肺组织样本和人工感染的猪肺组织样本。结果显示，该方法对参考菌株和临床分离株全部检出，36份临床样本中检出Hps18份，App为阴性，与单项PCR检测结果一致，人工感染组织样本也均能检出。表明该

3、方法适用于Hps和App的临床快速检测。关键词：副猪嗜血杆菌；猪传染性胸膜放线杆菌；双重PCR方法中图分类号：$852．619文献标识码：A文章编号：1007—5038(2013)12—0029—05副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis，Hps)是感性试验，建立了可快速鉴别检测副猪嗜血杆菌和猪普通猪上呼吸道的一种共栖菌，能在特定条件下侵入传染性胸膜放线杆菌的双重PCR方法。机体而引起严重的全身性疾病，以纤维素性多发性浆1材料与方法膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。主要临诊症状为发1．1材料热、咳嗽、呼吸困难

4、、消瘦、跛行、共济失调和被毛粗乱1．1．1菌株与毒株Hps菌株参考血清1型等，剖检病理变化表现为胸膜炎、肺炎、心包炎、腹膜(HS82)、2型(HS83)、3型(H$81)、4型(H$79)、5型炎、关节炎和脑膜炎等；主要危害2周龄～8周龄的仔(HS80)、6型(HSLO72)、7型(HSLO73)、8型猪，发病率一般为10～15，病死率可达5O以(HS1073)、9型(H$50)、10型(H$1076)、11型上_I]。猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuro-(HSLO77)、12型(HSLO7

5、5)、13型(HSLO79)、14型pneumoniae，App)是猪传染性胸膜肺炎(Porcinein～(HS1080)、15型(HSLO81)、10o株Hps临床分离株fectiouspleuropneumonia)的致病菌，以急性出血和慢(swuN050～SWUN151)，App参考菌株血清1型性纤维素性坏死性胸膜炎病变为主要特征，慢性症状(CVCC259)、血清2型(CVCC260)、血清3型表现为可造成猪生长缓慢的肺损伤，给世界各地养猪(CVCC261)、血清4型(CVCC262)、血清5型业造成严重经济损

6、失口]。在临床诊断中，很难通过临(CVCC263)、血清6型(CVCC264)、血清7型床症状和病理特征鉴别这两种疾病的混合感染。而(CVCC265)、血清8型(CVCC266)、血清9型传统的鉴别诊断方法，即病原分离和血清学诊断，由(CVCC267)、血清lO型(CVCC268)、血清11型于敏感性和特异性不高，不能满足快速鉴别诊断的需(CVCC269)、血清12型(CVCC270)，15株App临床要，所以建立一种快速准确的病原检测方法尤为重分离株(swuN170～SwUN182)，支气管败血波氏杆要。多重PCR

7、作为一种特殊的PCR比单项PCR更菌(SWUN200)、猪源多杀性巴氏杆菌(swuN2O1)、加快捷和简便，已应用于诊断多种疾病的混合感猪源大肠埃希菌(SWUN203)、猪源沙门菌染[4]。本试验根据Hps16SrRNA序列和App(SWUN204)、猪源金黄色葡萄球菌(SWUN205)、猪ApxlVA基因序列各设计一对引物，通过特异性和敏圆环病毒2型(swuN061)、猪流感病毒(H1N1)、猪收稿日期：2013—07—08基金项目：“十二五”国家高技术研究发展(863)计划项目(2012AA101304)；西南民

8、族大学中央高校基本科研项目(13NZYBS12)作者简介：余远迪(1986一)，女，贵州安顺人，硕士，主要从事病原分子生物的研究。*通讯作者3O动物医学进展2013年第34卷第12期(总第246期)繁殖与呼吸综合征病毒(疫苗株)、大肠埃希菌JM109板，在Hps、App单项PCR稳定的基础以25L总菌株为本实验室分离鉴定并保存(表1)。体积，优