顺序注射-紫外可见分析系统用于酶法检测尿酸.pdf

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1、第41卷第8期广州化工Vo1．41No．82013年4月GuangzhouChemicalIndustryApril．2013顺序注射一紫外可见分析系统用于酶法检测尿酸胡晶，祝蕾，王珍妮，王佩瑶，杨梅(辽宁师范大学化学4t5：r-学院，辽宁大连116029)摘要：利用已构建的顺序注射一紫外可见分析系统，基于尿酸氧化酶催化尿酸和辣根过氧化物酶催化过氧化氢的酶偶联反应，建立了在线检测尿酸的新方法。在最优实验条件下，对方法的分析性能进行了评价。结果表明，所建立的方法线性范围为0．025～0．60mmol／L，检出限为0．01mm

2、ol／L，能够满足临床分析要求；且分析速度快、试剂试样}肖耗量小。因此本方法有望应用于人血清尿酸水平的监测。关键词：尿酸；酶法；顺序注射一紫外可见分析系统中图分类号：0657．32文献标识码：A文章编号：1001—9677(2013)08一o110—03SequentialInjectionUV／VisSpectrometricEnzymaticAssayfortheDeterminationofUricAcidHUjing，ZHULei，WANGZhen—ni，WANGPei—yao，YANGMei(SchoolofCh

3、emistryandChemicalEngineering，LiaoningNormalUniversity，LiaoningDalian116029，China)Abstract：Basedontheenzyme—coupledreactionofurateoxidaseandhorseradishperoxidase，theonlinedetectionmethodforuricacidwasdevelopedbyusingtheestablishedsequentialinjectionUV／Visspectrome

4、tricsystem．Undertheoptimalexperimentalconditions，theanalyticalperformanceofthismethodwasevaluated．Thisprocedurenotonlyprovid—edalinearrangeof0．025～0．60mmolfLanddetectionlimitof0．01mmoL／L．whichmettheneedsoftheclinicalanaly．sisofuricacid，butalsominimizedsampleandrea

5、gentconsumption．Keywords：uricacid；enzyme—coupledmethod；sequentialinjectionUV／Visspectrometricsystem生物分子尿酸(2，4，6三羟基嘌呤，简称uA)是血中主要1．1仪器与试剂的非蛋白氮类代谢产物之一⋯，尿酸水平异常会引起痛风和‘肾UV一240紫外可见分光光度计，Et本岛津公司；双向注射病，因此血清尿酸测定是临床检测极为重要的生化指标之泵(Cavor，Sunnyvale，加拿大)；六位选择阀(Valco，美国)；l2。J一。目前检

6、测血清尿酸的方法有伏安法，高效液相色谱PHS一3C酸度计，上海雷磁仪器厂；微量移液器，上海大龙医法，毛细管电泳法，同位素质谱法等，而临床分析中最常用的疗设备有限公司；BS210S型电子天平，北京赛多利斯天平有限方法是酶法。公司。尿酸氧化酶(urateoxidase／uricase，简称UOD)将尿酸中UOD(1ku／mg，≥10u／mg)、HRP(EC1．11．1．7，RZ>3，的嘌呤环打开，生成尿囊素、二氧化碳和过氧化氢，与辣根过300u／mg)、UA(U2625—25G，／>99％)，Sigma公司；邻苯二氧化物酶(h

7、orseradishperoxidase，简称HRP)催化过氧化氢反胺(CN：，简称OPD，AR108．14)，天津市科密欧化学试剂应相偶联，利用电化学、紫外可见分子吸收、化学发光有限公司；磷酸二氢钾、磷酸氢二钠(均为分析纯)，天津市以及荧光等检测手段对尿酸进行定量分析。科密欧化学试剂有限公司；二次去离子水。现有的手动酶法分析需要底物完全消耗或需要在反应一段1．2实验方法时间后通过加热或加入抑制剂使酶失活，导致操作时间长、步骤繁琐、反应条件难以控制。而顺序注射分析能够精确控制反实验操作系统如图1所示⋯。应条件，有效降低试剂

8、试样消耗，因此顺序注射酶法分析的相首先吸入1000txL载液于注射泵中，然后从通道3#、5#、关研究逐渐引起关注。本研究在顺序注射一紫外可见分析系6#、2}}依次吸入6O的试液／标液、UOD、HRP和OPD溶液统内，采用酶偶联法对尿酸进行在线检测。至储存管中，以4OL／s的流速从通道4#反向推出至流通池