顺序注射-紫外可见分析系统用于酶法检测尿酸

《顺序注射-紫外可见分析系统用于酶法检测尿酸》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、利用紫外可见分析系统检测尿酸摘要：利用已构建的顺序注射一紫外可见分析系统，基于尿酸氧化酶催化尿酸和辣根过氧化物酶催化过氧化氢的酶偶联反应，建立了在线检测尿酸的新方法。在最优实验条件下，对方法的分析性能进行了评价。结果表明，所建立的方法线性范围为0.025-0.60mmol／L，检出限为0.01mmol／L，能够满足临床分析要求；分析速度快、试剂试样消耗量小。因此本方法有望应用于人血清尿酸水平的监测。关键词：尿酸；酶法；顺序注射-紫外可见分析系统1实验部分1.1仪器与试剂UV-240紫外可见分光光度计

2、，日本岛津公司；双向注射泵(Cavor，Sunnyvale，加拿大)；六位选择阀(Valco，美国)；PHS-3C酸度计，上海雷磁仪器厂；微量移液器，上海大龙医疗设备有限公司；BS210S型电子天平，北京赛多利斯天平有限公司。UOD(1ku／mg，≥10u／mg)、HRP(ECl．11．1．7，RZ>3，300u／mg)、UA(U2625-25G，≥99％)，Sigma公司；邻苯二胺(C6H8N2，简称OPD，ARl08．14)，天津市科密欧化学试剂有限公司；磷酸二氢钾、磷酸氢二钠(均为分析纯)，天

3、津市科密欧化学试剂有限公司；二次去离子水。1.2实验方法实验操作系统如图1所示首先吸入1000mL载液于注射泵中，然后从通道3#、5#、6#、2#依次吸入60uL的试液／标液、UOD、HRP和OPD溶液至储存管中，以40uL／s的流速从通道4#反向推出至流通池，用uV-240紫外可见分光光度计扫描其吸收光谱，记录430nm处的吸光度值为At；以1#通道缓冲溶液代替试液／标液测定空白值为A0，根据相对吸光度值△A=A0-At对尿酸进行定量。2.1酶法检测尿酸的原理及紫外吸收光谱图酶偶联法检测尿酸的紫外

4、吸收光谱如图2所示，UOD催化UA产生过氧化氢，在HRP的作用下与显色剂邻苯二胺生成有色物质2，3-二氨基吩嗪，在430nm处有特征吸收峰。2.2酶偶联法检测尿酸的条件优化2.2.1pH的优化利用酶偶联法(HRP和UOD)检测尿酸，由于HRP的等电点是7.2／8.8，UOD的等电点是5.3／5.6，在不同的pH条件下，两种酶协同作用催化尿酸的效果不同，因此考察了pH对检测UA的影响。结果如图3所示，在pH为8.0时，催化效果最好。2.2.2酶浓度的影响酶浓度对于酶偶联法检测尿酸有一定的影响，酶的浓度

5、太小，反应不能完全；浓度太大，不仅浪费试剂的消耗，也会降低反应的灵敏度。实验中对UOD的浓度进行了优化，结果如图4所示，在UOD浓度为0.5u／mL时，催化效果最好。2.2.3流速的影响在顺序注射非平衡系统中，溶液的混合及扩散程度更为复杂，流速不仅影响酶偶联反应速率，而且影响酶偶联反应产物的扩散。流速太大，反应不完全；而流速太小，产物在通道内扩散导致检测信号降低。因此有必要考察流速对吸光度的影响。从图5可看出，在5-40uL／s的流速范围内，吸光度值呈上升趋势，在40-70uL／s的流速范围内，吸光

6、度值呈下降趋势。因此选择40uL／s的流速，催化效果最佳。2.3酶法检测尿酸的分析性能在最优实验条件下，酶偶联法在线检测尿酸在0.025～0.60mmol／L的线性范围内，线性回归方程为△A=0.4358C+0.1004(R2=0.9806)，检出限为0.01mmol／L，相对标准偏差为1.1％，试剂和酶的消耗量均为60uL，分析频率为32h-1。酶偶联法避免了在测定实际样品时基体物质在293nm处的干扰，灵敏度较好。进一步证明顺序注射酶法分析的样品和酶试剂消耗少，分析速度快。参考http://ww

7、w.yusnoinstru.com/，http://www.yunuo-yiqi.com/