实验一水质的微生物检测.ppt

《实验一水质的微生物检测.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、水微生物检测南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生实验课时：8学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：2人实验目的与要求掌握水样采集规则及注意事项。熟悉常用水卫生细菌学指标。熟悉菌落总数、大肠菌群的测定方法及检测意义。学会对所检测的水样作综合分析。水微生物检测的意义水体的微生物污染问题日趋严重。在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长。水体中微生物污染的来源：土壤，以及人类、动物的排泄物污染。水体中少数致病微生物（主要来自人或动物的粪便污染）可

2、导致某些肠道传染病传播。水微生物检测可用于评价水质情况，预报水质的污染趋势，以保证水质的卫生安全。在实际工作中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对水体中各种可能存在的致病微生物一一进行检测。一般选择有代表性的一种或一类微生物作为指示菌，通过对指示菌的检测，来了解水体是否受到过的微生物污染，是否有肠道病原微生物存在的可能。水微生物的检测指标菌落总数(aerobicbacterialcount)是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检样品

3、的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。水质微生物的检测指标总大肠菌群(coliformbacteria)是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。检测意义：作为粪便污染的指标。水样总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。实验内容水样采集；菌落总数的测定；总大肠菌群的测定。一、水样采集采样原则所采集的样品具有代表性。采样容器：选择硼硅玻璃瓶和聚

4、乙烯塑料瓶。不能是新的污染源；不吸收或吸附某些待测组分；不与待测组分发生反应。保证从采样到分析期间，样品各组分的浓度不发生改变。必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证在运送、贮存过程中不受污染。自来水水样：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min（经常用水的水龙头放水1～3min）后，采集水样于无菌锥形瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，一般距水面下10～15cm采样。采样后，将瓶塞盖好，再从水中取出。注意事项严格无菌操作。做好标记：采得水样后应立即记录

5、水样名称、地点、时间等项目。从速送检。水样从采集到检验不应超过2h，在0～4℃下保存不应超过24h。二、菌落总数的测定—平板菌落计数法（一）生活饮用水[器材与试剂]无菌1ml吸管1支/组，无菌平皿3个/组，营养琼脂。[方法]水样摇匀20~25次，使细菌分散。倾注培养：无菌吸取1ml水样分别置于2个空平皿，另一个作空白对照。再倾注15ml琼脂（约45℃）于平皿中旋转，混匀待琼脂凝固后倒置37℃24h。菌落计数：用肉眼或放大镜检查，计数平皿内菌落数目。[结果分析与报告]计算平均菌落数：报告方式：菌落总数(cfu/ml)。c

6、fu：colonyformingunits当检样的菌落数为l~100时，按实有数报告；大于100时，采用二位有效数字报告。国家标准（GB5749-2006）规定生活饮用水菌落总数每毫升不得超过100个。（二）水源水[器材与试剂]无菌1ml吸管6支/组，无菌10ml吸管1支/组。无菌平皿9个/组，营养琼脂。90ml灭菌盐水1瓶（内置适量玻璃珠），9ml灭菌盐水管3支。[方法]稀释水样：无菌吸10ml混匀水样注入90ml灭菌水瓶中,混匀成1:10水样。取1:10水样1ml注入9ml灭菌试管中混匀成1:100水样。同法稀释成

7、1:1000,1:10000水样。[方法]倾注培养：用1ml无菌吸管吸取2~3个适当浓度的稀释液1ml,分别注入无菌平皿中，每个稀释度应同时做2个平皿，另取一平皿作空白对照。再做倾注培养(方法同饮用水)。菌落计数：方法同饮用水。菌落总数测定[结果分析与报告]计算不同稀释度的平均菌落数：稀释度的选择和菌落总数报告方式：首先选择平均菌落在30～300之间者进行计算。计算方法和报告方式如表1所示。表1稀释度选择及菌落总数报告方式例次不同稀释度的平均菌落数两稀释度菌落总数之比菌落总数(cfu／m1)报告方式(cfu／m1)10

8、-110-210-312345678136527602890150多不可计27多不可计01642952713046501l305020466085135120—1.62.22————164003775027100150051300027030500<1×1016000或1.6×10438000或3.8×10427000或2.7×1