酒石酸亚铁法测定茶多酚.doc

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1、方法一：酒石酸亚铁法测定茶多酚1.适用范围：茶叶、茶粉及其制品，茶饮料等。 2.原理：在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，均称茶多酚。茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，可用分光光度法测定其含量。 3.试剂：所用试剂应为分析纯，水为蒸馏水或去离子水。3.1酒石酸亚铁溶液：称取1g（准确至0.0001）硫酸亚铁，5g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至1L（低温保存，有效期10天）。3.2PH7.5磷酸缓冲溶液：3.2.11/15M磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠，加水

2、溶解后定容至1L。3.2.21/15M磷酸氢钾：称取经110℃烘干2小时的磷酸二氢钾9.08g，加水溶解后定容至1L。取上述1/15M的磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M的磷酸二氢钾15ml混合均匀。 4.仪器及用具：4.1分光光度计4.2磨碎机：由不吸收水分的材料制成；死角尽可能小，易于清扫；使磨碎样品能完全通过孔径600~1000um的筛子。 5.操作步骤：5.1茶叶：5.1.1试样的制备：（紧压茶以外的各类茶）先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分。如果水分含量太高，不能磨到2.2所规定的细度，必须将样

3、品预先干燥（烘箱不超过100℃为宜）。待试样冷却后（置干燥器内），再进行磨碎。5.1.2试液的制备：（1）称取3g（准确至0.001g）磨碎试样于500ml锥形瓶中。（2）加沸蒸馏水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min。若水浴无振动装置则每隔10min摇动一次。（3）浸提完毕后，冷却后（自然冷却或于自来水流下冷却）将样液转移到500ml容量瓶内，并定容至刻度。（4）定容后立即常压过滤，弃去初滤液（5ml以上），收集滤液备用。（所用滤纸为杭州新华纸业有限公司，双圈牌，定量，慢速滤纸）。5.2茶粉：茶粉试液的制备

4、：称取一定量的样品，用沸蒸馏水450ml冲泡，冷却后用蒸馏水稀释定容至500ml。5.3茶饮料、茶汁：5.3.1较透明的样液，如果味茶饮料：将样液充分摇匀后，备用。5.3.2较浑浊的样液，如果汁茶饮料：称取充分混匀的样液25ml于50ml容量瓶中，加入95%乙醇（C2H2OH）15ml，充分摇匀，放置15min后，用水定容至刻度。用慢速定量滤纸过滤，滤液备用。5.3.3含碳酸气的样液：量取充分混匀的样液100ml于250ml烧杯中，称取其总质量，然后置于电炉上加热至沸腾，在微沸状态下加热10min，将二氧化碳气排除。

5、冷却后，用水补足原来的质量。摇匀后，备用。5.4测定：5.4.1用20ml移液管精确量取20ml待测样品至100ml定量瓶中，加入蒸馏水（或RO水）稀释定容至100ml，充分振荡混匀。5.4.2于25ml容量瓶内吸取5ml稀释液。对于5ml移液操作，请使用5ml定量加样器（即移液枪）进行精确操作；若没有定量加样器方采用5ml移液管进行精确操作。5.4.3加酒石酸亚铁溶液5ml，充分混合，再加PH7.5缓冲液至刻度，摇匀。5.4.4用10mm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A1）。（试剂空

6、白溶液为：5ml蒸馏水（或RO）水+5ml酒石酸亚铁溶液+磷酸缓冲液定容至25ml）5.4.5同时移取等量的试液于25ml容量瓶中，用PH7.5磷酸缓冲液定容至刻度，测定其吸光度（A2）。（试剂空白溶液为：5ml蒸馏水（或RO）水+磷酸缓冲液定容至25ml） 6.结果计算：6.1茶叶及茶粉中茶多酚的含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：式中：A1—试液显色后的吸光度；L1—试液的总量，ml；L2—测定时的用液量，ml；M—试样的质量，g；m—试样干物质含量百分率，%；1.957—用1cm比色杯，当吸光度等于0.5时

7、，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。6.2饮料中茶多酚含量按下式计算：式中：A1—试液显色后的吸光度；A2—试液底色的吸光度；K—稀释倍数；L—测定时吸取试液的体积，ml；1.957—用1cm比色杯，当吸光度等于0.5时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。 7.重复性：7.1茶叶等同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.5g。7.2茶饮料等同一样品的两次测定值之差，不得超过平均值的5.0%。 8.备注：8.1酒石酸亚铁溶液应妥善保存，若有沉淀或颜色发生变化等，应重新配制。8.21.957是

8、一个经验值，故各个操作步骤应严格要求。8.3整个实验过程控制在3小时之内。 9.参考资料：GB/T8302-2002《茶取样》GB/T8303-2002《茶磨碎试样的制备及其干物质含量的测定》GB/T8313-2002《茶茶多酚测定》GB2499—200《茶饮料行业标准》