流式常用试剂配制.doc

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1、一、流式细胞术常用试剂1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。2、3％BSA/PBS：100mlPBS中加入3gBSA，使之溶解，再加入0.2ml10％的NaN3。3、500mmol/LEDTA：将186gEDTA•Na2•2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至8.0，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100mlPBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4，使用前新鲜配制。5

2、、消化液：0.25％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或0.25％胰蛋白酶与0.02％EDTA的混合液。6、红细胞裂解液：NH4Cl4.16g，KHCO30.5g，EDTA•2Na0.02g，溶于100ml水中，调PH至7.2，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/LPBS液（PH7.4）＋1％BSA＋0.1％Na2N3。8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH7.4）＋1％FBS（或BSA）＋0.1％NaN3＋0.1％saponin（Sigma的效果不错）。9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、0.1％NaN3的P

3、BS（PH7.4）。10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mgPI溶于10mlPBS，加入2mg无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加0.3ml～0.5mlPI染液。11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液）原液ANaCl160gMgSO4•7H2O2gKCl8gMgCl•6H2O2gCaCl22.8g溶于1000ml双蒸水原液B1）Na2HPO4•12H2O3.04gKH2PO41.2g葡萄糖20.0g溶于800ml双蒸水2）0.4％酚红溶液：取酚红0.4g置

4、玻璃研钵中，逐滴加入0.1NNaOH并研磨，直至完全溶解，约加入0.1NNaOH10ml。将溶解的酚红吸入100ml量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中，最后补加双蒸水至100ml。将1）液和2）液混合，补加双蒸水至1000ml即为原液B。应用液：原液A1份原液B1份双蒸水18份混合后，分装于200ml小瓶中，高压灭菌。临用前用无菌的5.6％NaHCO3调PH至7.2～7.6。12、磷酸盐缓冲液的配制（PB）A液（0.2mol/LNaH2PO4水溶液）：NaH2PO4•H2O27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。B液（0.2mol/LNa2HP

5、O4水溶液）：Na2HPO4•7H2O53.6g加蒸馏水溶解，加水至1000ml。不同PH值PB的配制：A液xml（参照下表）中，加入B液yml，为0.2mol/L的PB。若再加蒸馏水至200ml，则成0.1mol/LPB。PHx/mly/ml5.793.56.55.892.08.05.990.010.06.087.712.36.185.015.06.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851.049.06.945.055.07.039.061.07.133.067.07

6、.228.072.07.323.077.07.419.081.07.516.084.07.613.087.07.710.090.07.88.5091.07.97.0093.08.05.3094.713、PBS的配制配制PBS，只要在相应的PB基液中加入8.5g/LNaCl即可。二、常用激活剂1、激活剂PMA：用DMSO配制成0.1mg/ml，分装20ul/管，－20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS1：100稀释储存液，终浓度为20ng/ml。2、激活剂离子霉素：用乙醇配制成浓度为0.5mg/ml的储存液，－20度保存。实验时用无菌、无叠氮钠PBS1：

7、10稀释储存液，终浓度为1ug/ml。3、StaphylococcalenterotoxinB(SEB)：用无菌无叠氮钠PBS调节浓度0.5mg/mL，4℃储存，SEB终浓度10ug/mL。4、CD3：包被在培养板中，在蛋白转运抑制剂存在下活化未稀释的血液细胞。5、CD28：加速不同刺激剂（包括SEB、CD3等）的活化效应，浓度一般为10ug/ml。6、阻断剂BregeldinA：用DMSO配制成浓度为5mg/ml的储存液，分装20ul/管，－20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS1：10稀释储存液，在激活过程最后4～5小时使用BFA，终浓度为10