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时间:2020-03-25
《橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、南方农业学报JournalofSouthernAgiculture2016,47(2):163—168ISSN2095-119l:CODENNNXAABhttp://www.nf.yxb.comDOI:10.39690:issn.2095-1191.2016.02.163橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定贺永国1,李哲”,黄绵佳”,曾宪海2,林位夫2,刘洁琼2,张春红2,马晓晓3(1海南大学园艺园林学院,海口570228;2中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室,海南儋州571737;3海南大学农学院,海1:2570228)摘要:【目的】克
2、隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.J(PHEv2.J),构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(HbHMGRj)的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础。【方法1根据已报道的HEV2。J序列(GenBank登录号AY247789.1)设计1对特异引物,采用PCR从橡胶树热研7.33.97基因组DNA中克隆PHEV2.J,与HbHMGRl基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体,并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定。【结果】用特异引物可从热研7.33.97基因组DNA中扩增获得1852bp的PHEV2.J片段,其与AY247789.1启动子序列的同源性为98.6%。将PI-1EV2.
3、j与硪'HMGRj基因融合构建乳管特异性植物表达载体pCAMBIA2301.PHEV2.1-HbHMGRI,经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功。【结论】将PHEV2.J和HbHMGRI基因先构建至IJpCAMBIA3301载体上再克隆至pCAMBIA2301载体上,能有效解决直接克隆至pCAMBIA2301载体上出现Pstl突变、阻碍载体构建的难题,成功构建获得乳管特异性植物表达载体pCAMBIA2301.PHEV2.1-IToHMGRJ。关键词:橡胶树;乳管特异性启动子PHEV2.』;HbHMGRl基因;植物表达载体;构建;鉴定中图分类号:$794.1文献标志码:A文章编
4、号:2095—1191(2016)02—0163—06ConstructionandidentificationofbinaryvectorcontainingHbHMGRlgenefromlaticiferofHereabrasiliensisHEYong—gu01,LIZhe”,HUANGMian-jia”,ZENGXian—hai2,LINWei-fu2,LIUJie—qion92,ZHANGChun—hon92,MAXiao-xia03(1CollegeofHorticultureandLandscapeArchitecture,HainanUniversity,Haikou57022
5、8,China;2RubberResearchInstitute,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofRubberBiologyandGeneticResourceUtilization,MinistryofAgriculture,Danzhou,Hainan571737,China;3AgriculturalCollege,HainanUniversity,Haikou570228,China)Abstract:【Objective】111epresentexperimentwasconductedtoclo
6、nespecificstrongpromoterHEy2.I(PHEv2.J)ofHeveabrasiliensislaticiferandconstruct1aticifer’Sspecificplantexpressionvectorcontainingkeyrate-limitingenzymegeneHbHMGRIinnaturalrubberbiosynthesis.inordertolaythefoundationforfurthergenetictransformationofH.brasiliensis.【Method】Accordingtoreportedsequenceof
7、HE睨.J(GenBankAccessionNO.AY247789.1),apairofspe—cificprime巧Wasdesigned.Thenthepromoter(PHEV2.J)ofHEv2.IgenewasclonedfromgenomicDNAofHbrasiliensisReyan7—33—97bvPCRmethod,andwhichwasfusedwithHbHMGRlgene
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