菊花的植物组织培养.doc

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1、菊花的植物组织培养一、实验目的和内容1目的：(1)熟悉植物组织培养的基本过程，了解影响植物组织培养的各种因素(2)掌握组培无菌操作技术2内容：二、实验材料和用具1.菊花茎或叶片(也可以用其他植物的器官或纽织)。2.MS培养基、蔗糖、琼脂粉、NAA、6-BA、0.lmol/LNaOH>0.lmol/LHCL>70%乙醇、质量分数为2%的次氯酸钠溶液、蒸倔水、无菌水3.培养皿、锥形瓶、解剖刀、剪刀、钱子、滤纸、烧杯、酒精灯、火柴、封口膜、线绳、标签、铅笔、细菌过滤膜、注射器、电子天平、称量纸、药匙、超净工作台、光照培养箱。三、操作步骤(一)制备M

2、S固体培养基MS培养基配方:成分分亍量1便用浓度(mg/L)丈:量元疾母液I(1OX)硝醪钾1O1.1111900硝酸車安80.041650碗酸二氢钾136.09170246.47370祗化©丐147.02440徹量元皋母液II(1OOX)腆化钾166.010.83硼酸61.836.2223.0122.3硫酸锌287.548.6电目飕钠241.950.25249.680.025氯化钻237.930.025铁盐母液IIICLOOX〉乙一胺四乙酸一钠372.2537.3毓酸亚铁278.0327.8有机成分母液IV(1OOX)肌薛100甘氨醱2盐酸

3、硫胺素VB10.1盐酸口比哆醇VB60.5烟酸VB5或VPP0.5蔗糖342.3130g/L菊花的植物组织培养一、实验目的和内容1目的：(1)熟悉植物组织培养的基本过程，了解影响植物组织培养的各种因素(2)掌握组培无菌操作技术2内容：二、实验材料和用具1.菊花茎或叶片(也可以用其他植物的器官或纽织)。2.MS培养基、蔗糖、琼脂粉、NAA、6-BA、0.lmol/LNaOH>0.lmol/LHCL>70%乙醇、质量分数为2%的次氯酸钠溶液、蒸倔水、无菌水3.培养皿、锥形瓶、解剖刀、剪刀、钱子、滤纸、烧杯、酒精灯、火柴、封口膜、线绳、标签、铅笔、

4、细菌过滤膜、注射器、电子天平、称量纸、药匙、超净工作台、光照培养箱。三、操作步骤(一)制备MS固体培养基MS培养基配方:成分分亍量1便用浓度(mg/L)丈:量元疾母液I(1OX)硝醪钾1O1.1111900硝酸車安80.041650碗酸二氢钾136.09170246.47370祗化©丐147.02440徹量元皋母液II(1OOX)腆化钾166.010.83硼酸61.836.2223.0122.3硫酸锌287.548.6电目飕钠241.950.25249.680.025氯化钻237.930.025铁盐母液IIICLOOX〉乙一胺四乙酸一钠372

5、.2537.3毓酸亚铁278.0327.8有机成分母液IV(1OOX)肌薛100甘氨醱2盐酸硫胺素VB10.1盐酸口比哆醇VB60.5烟酸VB5或VPP0.5蔗糖342.3130g/L琼月旨7g/L1、母液配制大量兀素（母液1）mg/L（2）微量兀素（母液11）（3）铁盐（母液Ill）（4）有机成分（母液IV）以上各种营养成分的用量，除了母液1为10倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。（5）植物生长调节物质（6-BA,NAA）均配制成lmg/ml2、培养基配制（1）配制1L培养基时,先将7g琼脂加入800mL的蒸锚水中,加热使琼脂熔化,然后

6、加入蔗糖30g,再用用量筒从各种母液屮分别取出所需的用量：母液I为100ml,母液II、III、IV各10ml,加蒸馆水定容至1L,（2）调节pH至5.8（3）封口并连同其他器具一起高压灭菌，（4）灭菌后待其冷却至55°C左右加入灭菌后的植物激素NAA和6-BA（所加的量取决于配制的是何种培养基）摇匀，具体比例参见下面注意事项。（5）立即分装至锥形瓶或罐头瓶约30mL/瓶并封口，待其冷却凝同备用。（二）外植体消扌选取菊花茎段吋，要取牛长吒盛的嫩枝。消毒步骤如下:1用流水冲洗后可加少许洗衣粉用软刷轻轻刷洗，后在流水下冲洗20min,用无菌吸水纸

7、吸干外植体表面水分;2放入体积分数70%酒精摇动2-3次,持续吋间6-7s,立即取出,在无菌水中清洗，然后用无菌吸水纸吸干外植体表面水分；3放入质量分数为2%的次氯酸钠溶液屮5-10min,然后用无菌水洗3次，再用无菌吸水纸吸干外植体表面水分;（三）接种接种前用70%酒精将工作台擦拭一•遍，然后点燃酒精灯，此后，所有的操作都必须在酒精灯旁进行。步骤如下：1将消毒后的菊花茎段置于无菌培养皿屮切成小段（长约0.5-lcm）,2左手持培养瓶，右手拉开捆扎培养瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心，避免污染。3左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰，右手用银子夹取菊

8、花茎段插入瓶屮，注意不能倒插，毎瓶接种6-8块外植体，然后将封口膜重新扎好。（四）培养接种好的锥形瓶放入无菌培养箱小培养，培养箱的参数设定包括温度（18-22°C）